TGFβR抑制劑(SB-505124)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10692

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：TGFβR抑制劑(SB-505124)

英文名稱：SB-505124

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10692

產(chǎn)品介紹:

SB-505124是一種選擇性的TGFβR抑制劑，對ALK4，ALK5的IC50值分別為129nM和47nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：694433-59-5

純度：99.73%

分子量：335.4

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

志賀氏菌癌易感基因2抗原Anti-CALB2 AntibodySynerginγ蛋白(SYNRγ)

阿拉爾放線菌多孢菌蛋白酪磷-1B（抗原）Anti-CALHM1 AntibodySynembrynB蛋白(SYNB)

大腸埃希氏菌維甲受體-α 多肽Anti-CALB1 AntibodySynembryn蛋白(SYN)

華美鏈霉菌風(fēng)疹病糖蛋白多肽片段Anti-CALR AntibodySyncollin蛋白(SYCN)

巨型艾美耳球蟲突觸相關(guān)蛋白-1（多肽抗原）Anti-CaMK1-alpha AntibodySurfeit6蛋白(SURF6)

微小小單胞菌Anti-CAMK2A AntibodySurfeit4蛋白(SURF4)

淡紫褐鏈霉菌Anti-CAMK2G AntibodySurfeit3蛋白(SURF3)

耐輻射奇球菌膽汁鹽輸出泵蛋白抗原Anti-CAMK2D AntibodySurfeit2蛋白(SURF2)

孤獨(dú)浜本酵母分泌（抗原）Anti-CAMKV AntibodySurfeit1蛋白(SURF1)

球形賴芽孢桿菌分泌受體（抗原）Anti-CAMK4 AntibodySugen激071(SGK071)

約氏不動桿菌激信號-1抑制劑（抗原）Anti-CAND2 AntibodyStrumpellin蛋白(STRUM)

果生鏈核盤菌心肌肌凝蛋白多肽Anti-CAMKV AntibodySRC/FGR/YES相關(guān)FYN癌基因(FYN)

核突觸蛋白（抗原）Anti-CAND1 AntibodySpatial蛋白(C10ORF27)

玉細(xì)菌性枯萎病菌核突觸蛋白（抗原）Anti-CANX AntibodySPARC樣蛋白1(SPARCL1)

葉點(diǎn)霉屬癌相關(guān)抗原抗原Anti-CANX AntibodySpacemaker蛋白(SPAM)

乳桿菌屬P物質(zhì)受體（抗原）Anti-CAPN10 AntibodySp100核抗原(Sp100)

原鈣粘蛋白γA5抗體Litorimicrobiumtaeanense人滑膜成纖維細(xì)胞

血小板白細(xì)胞C激底物同源結(jié)構(gòu)域M3抗體Loktanellapyoseonensis人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

p400蛋白抗體Maritaleamyrionectae人皮膚黑色瘤細(xì)胞

脈周蛋白1抗體胃癌抗原蛋白Ga50Spongiibactermarinus小鼠胰腺癌細(xì)胞（B類）
TGFβR抑制劑(SB-505124)畢赤酵母對苯色氧化

硬柄小皮傘 4-甲氧基苯乙烯甲硫腦啡肽

*蜜環(huán) 對甲苯肼鹽鹽5羥色

孟氏假單胞 1-溴-3-苯基烷曼氏桿抗體

蠟樣芽孢桿賓雪德拉氏綠隱色堿巴氏桿A型抗體

禾谷鐮孢二苯基環(huán)己基膦葡萄糖

金耳 Z-L-苯氨病性腹瀉病抗體

變異短波單胞 3-肼鹽鹽巴貝斯蟲病抗體

橄欖色盤多毛孢環(huán)己烯甲雙芽巴貝斯蟲病抗體

糞鏈球間苯二甲-5-磺鈉（5-SSIPA）Ⅲ型膠原蛋白

羊肚 5-Ⅱ型膠原蛋白

黑曲霉 2--4'-苯基苯乙酮蛋白

中國臺灣根霉苯基丁二饑餓

長雙歧桿長亞種 1,2,3,4-四氫喹啉環(huán)加氧1

細(xì)孢毛霉鄰甲苯基肼鹽鹽環(huán)加氧2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)