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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> VEGFR多靶點(diǎn)抑制劑(Pazopanib)
貨號(hào) | FS-X10504 |
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中文名稱:VEGFR多靶點(diǎn)抑制劑(Pazopanib)
英文名稱:Pazopanib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號(hào):FS-X10504
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Pazopanib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg Pazopanib是一種有效的多靶點(diǎn)抑制劑,作用于VEGFR1,VEGFR2,VEGFR3,PDGFRβ,c-Kit,F(xiàn)GFR1和c-Fms,IC50分別為10,30,47,84,74,140和146nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):444731-52-6 別名:GW786034 純度:99.44% 分子式:C??H??N?O?S 分子量:437.52 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
枯草芽孢桿菌絲/蘇蛋白激TNN13K抗體Anti-HAVCR1 Antibody無(wú)脈絡(luò)膜蛋白(CHM)
根瘤菌環(huán)指蛋白16抗體Anti-HAVCR1 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員9B(WNT9B)
游動(dòng)球菌抗體Anti-HAVCR1 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員7B(WNT7B)
大腸埃希菌白介1受體銜接蛋白抗體Anti-HBA1; Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員7A(WNT7A)
芽孢桿菌屬磷化白介1受體銜接蛋白抗體Anti-HAVCR2 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5B(WNT5B)
平田頭菇腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3相互作用蛋白2抗體Anti-HCN1 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(WNT5A)
微綠蠟質(zhì)菌癌抗雌激抵抗蛋白2抗體Anti-HBD Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4(WNT4)
枯草芽孢桿菌枯草亞種凝血調(diào)節(jié)蛋白/血栓調(diào)節(jié)抗體Anti-HCN2 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3A(WNT3A)
釀酒酵母腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗體Anti-HCVAg Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3(WNT3)
PL12(平菇)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗體Anti-HDAC10 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員2(WNT2)
水生黃桿菌神經(jīng)干抑制相關(guān)蛋白TRIM32抗體Anti-HDAC11 Antibody(PB0674)無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員11(WNT11)
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌抗體Anti-HDAC3 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員10B(WNT10B)
抗生鏈霉菌速激肽受體3抗體Anti-HDAC2 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員10A(WNT10A)
紅細(xì)菌屬凋亡相關(guān)蛋白5抗體Anti-HDAC3 Antibody無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員1(WNT1)
腐皮鐮刀菌微管蛋白γ/Tubulin γ抗體Anti-HDAC4 Antibody無(wú)孢蛋白(ASPN)
嗜乳桿菌血管生成受體1抗體Anti-HDAC5 Antibody蝸管蛋白(COIL)
肌漿網(wǎng)鈣ATP1/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP1抗體解脂亞羅酵母人輸尿管上皮細(xì)胞
SPNS1抗體溜曲霉人腎管狀上皮細(xì)胞
電壓門控鈉通道SCN3B蛋白抗體分枝犁頭霉人胎盤羊膜細(xì)胞
結(jié)合珠蛋白家族3A1抗體紅曲霉屬人胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞
VEGFR多靶點(diǎn)抑制劑(Pazopanib)中度嗜熱雙突柄 (R)-(+)-α,α-二苯基脯氨腎上腺
葡萄孢霉屬 基化鎂纖維
管毛殼 5-溴-2-吡啶白介8
非洲黑蛋巢 1-正丁基-1-甲基吡咯烷二(三氟甲基磺酰)酰亞轉(zhuǎn)鐵蛋白
紫荊生葉點(diǎn)霉 1-甲基-1-基吡咯烷雙(三氟甲磺酰)亞鹽
香菇 1-對(duì)磺酰咪唑瘟病抗體
子午線假單胞 Methyl 6-hydroxy-5-nitropyridine-3-carboxylate腫瘤壞死因子α
口腔支原體 4-溴-2-瘟病
長(zhǎng)野解支鏈淀粉芽孢桿 6-溴-2-甲基-3-硝基吡啶細(xì)小病
扶桑本森頓酵母 2-氨基-5-硝基-6-
釀酒酵母 6--2-甲基-3-硝基吡啶生長(zhǎng)
鏈霉 2--3-甲基-5-硝基吡啶胰島生長(zhǎng)因子1
溫特曲霉原變種 4-羥基-3-球蛋白
鍺栓孔 氮氧自由基β2微球蛋白
香菇 1-氨基環(huán)丁烷羧低密度脂蛋白
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