B-RafV600E抑制劑(PLX-4720)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10580

中文名稱：B-RafV600E抑制劑(PLX-4720)

英文名稱：PLX-4720

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10580

產(chǎn)品介紹:

PLX-4720是一種有效的，選擇性的B-RafV600E抑制劑，IC50值為13nM；與對c-Raf-1的選擇性相同，是對野生型B-Raf選擇性的10倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：918505-84-7

純度：99.62%

分子量：413.83

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

維羅納假單胞菌5-羥色受體5A抗體Anti-PDE6 alpha/PDE6A Antibody連接橋粒斑珠蛋白(JUP)

枯草芽孢桿菌5-羥色受體7抗體Anti-PDE6 beta/PDE6B Antibody連接附著分子3(JAM3)

韓國游動微菌SCEL蛋白抗體Anti-PDGFB Antibody連接附著分子1(JAM1)

茶藨子葡萄座腔菌相關(guān)抗原8抗體Anti-PDGFB Antibody連接蛋白4(JPH4)

美味絲葚霉T淋巴識別的鱗狀癌抗原抗體Anti-PDGFB Antibody連接蛋白3(JPH3)

馬腺疫鏈球菌獸疫亞種S100A2抗體Anti-PDGFRA Antibody連接蛋白2(JPH2)

糞銹傘周期G2/M期快速誘導(dǎo)蛋白SPDYA抗體Anti-PDGFRB Antibody連接蛋白1(JPH1)

不動桿菌屬5-羥色受體6抗體Anti-PDK1 Antibody連環(huán)蛋白δ2(CTNNδ2)

Aurantimonas altamirensis ATP依賴解旋SMARCA2抗體Anti-PDIA3 Antibody(PB0808)連環(huán)蛋白δ1(CTNNδ1)

紅色長孢鏈霉菌S期激相關(guān)蛋白1抗體Anti-PDIA3 Antibody連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)

大雞03SHFM3蛋白抗體Anti-PDK1 Antibody連環(huán)蛋白α3(CTNNα3)

粗糙脈孢菌硫氧還蛋白1抗體Anti-PDK2 Antibody連環(huán)蛋白α2(CTNNα2)

科氏葡萄球菌科氏亞種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接蛋白1抗體Anti-PDK4 Antibody連環(huán)蛋白α1(CTNNα1)

蠟狀芽孢桿菌磷化酪蛋白激Fyn/同步原癌基因抗體Anti-PDK2 Antibody粒特異性抗核抗體(GSANA)

韓芝絲棕櫚酰轉(zhuǎn)移2抗體Anti-PDK4 Antibody粒趨化蛋白2(GCP2)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體Anti-PDPK1 Antibody粒集落激因子受體(GCSFR)

中心粒蛋白Nudel抗體Mucilaginibactermallensis人胰腺上皮細(xì)胞提取物

泛樣蛋白NEDD8抗體克氏葡萄球菌人乳腺上皮細(xì)胞提取物

NADH氧化還原輔10抗體Bacteroidesovatus人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞提取物

線粒體復(fù)合物NDUFS4蛋白抗體Streptomycesrapamycinicus人直腸癌組織源細(xì)胞提取物
B-RafV600E抑制劑(PLX-4720)紫芝 4-羥基甲酯O-脫乙基

枯草芽孢桿 4-羥基苯乙芳基酰

鼠李糖乳桿 Fmoc-Cys(Pmeobzl)-OH木質(zhì)

美澳型核果褐腐病 3,5-二氟溴芐維生B1

土壤柔武氏 2-(叔丁氧羰基氨基)-維生B2

干酪乳桿 4--DL-苯甲酯鹽鹽維生B4

多主葡萄殼 L-4-苯維生B12

聚生殼 N-Boc-3-羥基氮雜環(huán)丁烷維生B13

疏毛盤多毛孢決奈達(dá)隆鹽鹽維生B3

棕色固氮 1,3-雙(2,4,6-三基)化咪唑褪黑

光帽鱗傘 1,3-二均苯基咪唑-2-叉葡萄糖氧化

皮膚皮狀新絲孢酵母 2,3,4,6-O-四乙?；?beta-D-吡喃葡萄糖基異硫酯飽和脂肪

鞘氨桿屬氘代氫化鋰鋁不飽和脂肪

擬枝孢鐮孢雙(三苯基膦)二溴化鎳轉(zhuǎn)移

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