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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號 | AXB6427 | 規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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產(chǎn)品名稱 | LU65C人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | 貨號 | AXB6427 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | LU65C |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Ai-CD150/SLAM/FITC 熒光素標(biāo)記CD150抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Recomb Protein G 重組蛋白GMulti-class aibodies規(guī)格: 1mg
整合素-β3抗體 Ai-ITG-β3/CD61 0.1ml
MCT4 英文名稱: 單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋4抗體 0.2ml
Phospho-FGFR1 (Tyr307) 英文名稱: 0酸化堿性成纖維細(xì)胞生長因子受體1抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Phospho-PPAR Gamma (ser112) 0酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體 規(guī)格 0.1ml
Recomb Protein G 重組蛋白GMulti-class aibodies規(guī)格: 1mg
Ai-PS-1/FITC 熒光素標(biāo)記早老素蛋白-1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Ai-mouse IgG1 kappa-chain Whole serum 兔抗小鼠k-鏈抗血清Multi-class aibodies規(guī)格: 1ml
白介素4抗體 Ai-IL-4 0.1ml
Rabbit ai-Guinea pig IgG whole serum 兔抗豚鼠IgG抗血清 1ml
Phospho-FGFR1 (Tyr154) 英文名稱: 0酸化堿性成纖維細(xì)胞生長因子受體1抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Phospho-PSD93 (Tyr340) 0酸化突觸后密度蛋白93抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Ai-mouse IgG1 kappa-chain Whole serum 兔抗小鼠k-鏈抗血清Multi-class aibodies規(guī)格: 1ml
Ai-NPY /FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)肽 Y抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-HBsAg/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝表面抗原抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
CC趨化因子受體7抗體 Ai-CCR-7 0.1ml
Goat Ai-rat IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
phospho-FANCG (Ser383) 英文名稱: 0酸化DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh PMVK 0酸甲羥激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Ai-HBsAg/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝表面抗原抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-phospho-P53 (Ser46) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Ai-bov IgG/Biotin 化兔抗IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.1ml
鼠抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體 Ai-C-CRP 0.2ml
Rabbit Ai-pig IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.5ml
phospho-FANCD2(Ser1404) 英文名稱: 0酸化FANCD2抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-β catenin(Tyr142) 0酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Ai-bov IgG/Biotin 化兔抗IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.1ml
LU65C人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞Ai-NUMB/FITC 熒光素標(biāo)記膜相關(guān)蛋白Numb抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-ZNF300 /FITC 熒光素標(biāo)記鋅指蛋白300抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體 Ai-Caspase-13 0.1ml
Goat Ai-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml
phospho-FANCD2 (Ser222) 英文名稱: 0酸化FANCD2抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Polycystin 2 多囊腎蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml
Ai-ZNF300 /FITC 熒光素標(biāo)記鋅指蛋白300抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。
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