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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> BET蛋白抑制劑(GSK1324726A)
貨號(hào) | FS-X10847 |
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英文名稱:GSK1324726A
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10847
產(chǎn)品介紹:
GSK1324726A是一種有效的選擇性BET蛋白抑制劑,高親和力結(jié)合到BRD2(IC50=41nM),BRD3(IC50=31nM)和BRD4(IC50=22nM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1300031-52-0 別名:I-BET726 純度:98.21% 分子量:434.91 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
美梅奇酵母大鼠補(bǔ)體片斷5aAnti-Phospho-Rabphilin 3A (Ser234) Antibody人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)
剛第弓形蟲小鼠前列腺性磷Anti-Phospho-S6 Kinase 1 (Thr449) Antibody人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)
黑曲霉小鼠前列腺特異性抗原Anti-Phospho-Synapsin I (Ser9) Antibody人抗腎小球基底膜抗體(GBM)
大鼠補(bǔ)體片斷3aAnti-Phospho-Synapsin I (Ser62,67) Antibody人抗腎小球基底膜抗體(GBM)
褶皺曲霉人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3Anti-Phospho-Synaptotagmin (Ser309) Antibody人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)
產(chǎn)灰色鏈霉菌人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2Anti-Phospho-Synapsin I (Ser603) Antibody人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)
枯草芽孢桿菌大鼠卵泡抑Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser31) Antibody人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)
檸條根瘤菌小鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125Anti-Phospho-Synaptotagmin (Thr202) Antibody人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)
檸檬兩面神菌大鼠組織蛋白去乙?;?/span>Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody人抗腎小管基底膜抗體(TBM)
粉紅聚端孢霉小鼠癌標(biāo)志物-CA153Anti-PIAS3 Antibody人抗腎小管基底膜抗體(TBM)
松杉靈芝人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1Anti-PHYKPL Antibody人apelin 13(AP13)
雙孢蘑菇人黑色瘤標(biāo)記物Anti-PIGH Antibody人apelin 13(AP13)
雙孢蘑菇小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199Anti-PIGY Antibody人Apelin 36(AP36)
榛針孢酵母大鼠E選擇Anti-PIK3R5 Antibody人Apelin 36(AP36)
平菇—465大鼠甲基化Anti-PIN1 Antibody人肌鈣蛋白T(Tn-T)
玫瑰單胞菌小鼠血紅氧合1Anti-PIK3C2G Antibody人肌鈣蛋白T(Tn-T)
轉(zhuǎn)導(dǎo)β1X連鎖受體蛋白1抗體葡萄酒色被孢霉人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體粉樹孢人卵巢畸胎瘤細(xì)胞
腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記相關(guān)蛋白質(zhì)7抗體炭角菌F-12K*培養(yǎng)基:
TBC結(jié)構(gòu)域TBCD4蛋白抗體牛肝菌6-4小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞
BET蛋白抑制劑(GSK1324726A)硫氧化博斯氏 LBS瓊脂環(huán)磷鳥
糙皮側(cè)耳 MRS瓊脂環(huán)磷腺
兩形頭曲霉 ITC肉湯環(huán)氧合2
秦氏蜜環(huán) 環(huán)戊硫活化蛋白C
根瘤 BETA-SSA瓊脂活性氧簇
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 LIM培養(yǎng)基肌球蛋白輕鏈磷
威爾氏李斯特 煌綠黃嘧啶瓊脂肌激
大腸埃希 改良MSRV培養(yǎng)基肌激同工MB
枯草芽孢桿 SCCRAM肉湯基質(zhì)金屬蛋白1
香菇 (1S,2S)-N-(對(duì)甲苯磺酰)-1,2-二苯基乙二基質(zhì)金屬蛋白13
三孢布拉霉 BPL瓊脂基質(zhì)金屬蛋白9
白地霉 BPLS瓊脂敏感性脂肪
副豬嗜血桿 改良BPLS瓊脂己糖激
褐紅小孔 XLT4瓊脂甲狀腺
蘇云金芽胞桿勵(lì)木亞種 M-肉湯堿性磷
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