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貨號 | FS-X10906 |
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產(chǎn)品介紹:
GSK650394是一種新穎的SGK抑制劑,在SPA實(shí)驗(yàn)中,對SGK1和SGK2的IC50分別為62nM和103nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:890842-28-1 純度:99.38% 分子量:382.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:SGK抑制劑(GSK 650394)
英文名稱:GSK 650394
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10906
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
頂青霉人異腎上腺Anti-TRAF3IP3 Antibody人伴侶蛋白(CPN)
白靈側(cè)耳大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3Anti-TRAF5 Antibody人纖調(diào)蛋白(FMOD)
干酪乳桿菌人胰抑制Anti-TRAPPC3 Antibody人纖調(diào)蛋白(FMOD)
枯草芽胞桿菌枯草亞種大鼠神經(jīng)生長因子Anti-TRAPPC6A Antibody人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)
鞘菌屬大鼠巨噬炎性蛋白3αAnti-TRERF1 Antibody人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)
釀酒酵母人雄激受體Anti-TRARG1 Antibody人網(wǎng)膜(omentin)
氏假單胞菌大鼠層連蛋白/板層Anti-TREM1 Antibody人網(wǎng)膜(omentin)
流感嗜血桿菌人松弛肽/松弛Anti-TRBC1 Antibody人基質(zhì)γ羧基谷蛋白(MGP)
熒光假單胞菌大鼠白介6Anti-TRHR Antibody人基質(zhì)γ羧基谷蛋白(MGP)
畫眉草彎孢人生長激結(jié)合蛋白Anti-TRIL Antibody人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶(MAT)
蠟狀芽孢桿菌人腎上腺髓質(zhì)Anti-TRIM16 Antibody人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶(MAT)
松口蘑大鼠白介4Anti-TRHR Antibody人螺旋肽(THP)
樹舌3-1人免疫反應(yīng)性生長激Anti-TRIM29 Antibody人螺旋肽(THP)
松口蘑(可定)人硫褪黑色Anti-TRIM59 Antibody人溶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)
Bacillus 大鼠白介1αAnti-TRIM25 Antibody人溶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)
產(chǎn)黃青霉人長效甲狀腺激Anti-TRIM24 Antibody人軟骨糖蛋白39(HC gp-39)
泛蛋白連接G2抗體小豆殼二胞抗人BCS1-like小鼠7
泛蛋白連接L3抗體#膠質(zhì)芽孢桿菌抗SARS病毒N蛋白小鼠7
泛蛋白連接2N抗體禾谷絲核菌抗人IgA7
泛蛋白連接E3抗體姬松茸(斜面)抗赭曲霉毒A7
SGK抑制劑(GSK 650394)曲霉 氟、、硝根、硝根、硫根/F, Cl, NO3, PO4, SO4乙酰CoA羧化2
總狀共頭霉 氟、、亞硝根、硝根、硫根/F, Cl, NO2, NO3, SO4碳酐
凍干粉 克羅諾桿屬(阪崎腸桿)(陽性) 氟、、亞硝根、硝根、硫根/F, Cl, NO2, NO3, SO4超氧化物歧化1
光滑青霉 銅、鐵、錳、錫、鋅/Cu, Fe, Mn, Sn, Zn肺炎支原體特異性SIgA抗體
大腸埃希氏 鈰、鈷、鋰、鈦、釔 /Ce, Co, Li, Ti, Y纖維二糖
微黃棒桿 鎘、銅、鎳、鉛、鋅/Cd, Cu, Ni, Pb, Zn膽固?;D(zhuǎn)移
灰離褶傘(松毛菇) 鎘、銅、鐵、錳、鉛/Cd, Cu, Fe, Mn, Pb脂肪甘油三酯脂
宇佐美曲霉 鎘、鉻、汞、鉛、硒/Cd, Cr, Hg, Pb, Se3-羥基3-甲基戊二酰還原
大腸埃希氏 鈣、、鎂、鈉、/Ca, K, Mg, Na, NH4血管活性腸肽
假單胞屬 鉍、鍺、銦、鈧、釔/Bi, Ge, In, Sc, Y膽固7α羥化
釀酒酵母 鉍、銅、鐵、鉛、銻/Bi, Cu, Fe, Pb, Sbc-肽
油菜假單胞 2-甲基-1-苯基-2-傳染性胃腸炎病IgA抗體
大腸埃希氏 鉍、鎘、銅、鐵、銦/Bi, Cd, Cu, Fe, In脂肪甘油三酯脂
熒光假單胞 5-三氟甲基膽固?;D(zhuǎn)移
炭黑曲霉 鉍、鈣、汞、鎂、錫/Bi, Ca, Hg, Mg, Sn3-羥基3-甲基戊二酰還原
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