Aurora B抑制劑(Hesperadin)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10850

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Aurora B抑制劑(Hesperadin)

英文名稱：Hesperadin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10850

產(chǎn)品介紹:

Hesperadin是ATP競(jìng)爭(zhēng)性Aurora B抑制劑，IC50為250nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：422513-13-1

純度：99.67%

分子量：516.65

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

產(chǎn)氮假單胞菌小鼠絨毛膜促性腺激βAnti-PLK3 Antibody人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)

葉點(diǎn)霉屬人腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子Anti-PLXDC1 Antibody人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)

楊奇青霉人色上皮衍生因子Anti-PMCH Antibody人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型小鼠性激結(jié)合球蛋白Anti-PLXNC1 Antibody人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)

Chryseomicrobium imtechense人白介23Anti-PMS2CL Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)

樹舌2-3小鼠脫氫表雄S7Anti-PNKP Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)

金針菇（毛柄金錢菌、冬菇）人克拉拉蛋白Anti-PMEPA1 Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

pSH-EFIRES-B-AtAFB2-mCherry大鼠心肌營(yíng)養(yǎng)1Anti-PNCK Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

成晶節(jié)桿菌大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgAAnti-PMEPA1 Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)

釀酒酵母小鼠脫氫表雄Anti-PNN Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)

蛛網(wǎng)菌人低氧誘導(dǎo)因子1αAnti-PNPLA6 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)

火木層孔菌人黑色抗體Anti-PNPLA8 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)

豬丹絲菌小鼠高遷移率族蛋白B1Anti-PNPLA8 Antibody人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)

泡盛曲霉大鼠脂蛋白αAnti-PODXL2 Antibody人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)

金黃弗拉特氏菌人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Anti-POFUT1 Antibody人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)

圍小叢殼小鼠內(nèi)皮脂肪Anti-POFUT2 Antibody人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)

跨膜蛋白4超家族成員3抗體番茄葉點(diǎn)菌人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞

宮頸癌原癌基因8抗體貝氏葡萄座腔菌梨?；腿撕肀砥影┘?xì)胞

腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8抗體新月彎孢霉小鼠結(jié)節(jié)性硬化癥細(xì)胞

跨膜蛋白161A抗體柿苗擬莖點(diǎn)霉人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞
Aurora B抑制劑(Hesperadin)腐皮鐮孢亞硫鈉瓊脂球蛋白輕鏈lambda

枯草芽孢桿龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ)抑制性蛋白

油鑒別試劑硫十二烷基鈉瓊脂內(nèi)

球毛殼 PNB（對(duì)甲）內(nèi)皮1

核黃氧化德沃斯氏 -6-羧內(nèi)源性糖皮質(zhì)

分枝節(jié)桿 WL營(yíng)養(yǎng)瓊脂檸檬合

枯草芽孢桿改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基檸檬合

有柄樹舌靈芝(白芝)（可訂購(gòu)）沙氏BHI瓊脂凝集

黑木耳 -5-羧凝血原

地花 2-氨基-4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三皮質(zhì)

露濕擬漆斑 1,2-雙(二苯基膦)乙烷皮質(zhì)結(jié)合球蛋白

嗜糖土地芽孢桿 3-氨基-5-巰基-1,2,4-三氮唑皮質(zhì)酮;腎上腺酮

密叢毛霉改良亞硫鹽瓊脂皮質(zhì)抑

醬油曲霉 UBA培養(yǎng)基葡萄糖

果生核盤 NBB培養(yǎng)基葡萄糖-6-磷脫氫
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)