Bax誘導(dǎo)凋亡抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10698

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Bax誘導(dǎo)凋亡抑制劑

英文名稱：Bax inhibitor peptide V5

產(chǎn)品規(guī)格：5mg|10mg|25mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10698

產(chǎn)品介紹:

Bax inhibitor peptide V5是一種Bax誘導(dǎo)凋亡的抑制劑，主要用于癌癥研究。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：579492-81-2

別名：Val-Pro-Met-Leu-Lys;BIP-V5;BAX Inhibiting Peptide V5

純度：99.79%

分子量：586.79

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

貝萊斯芽胞桿菌嗜中性?？乖?/span>CD177抗原Anti-CD300LB AntibodyRasGTP激活蛋白1(RASA1)

根瘤菌CD24抗原Anti-CD300LD AntibodyRAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)

蘇云金芽孢桿菌白分化抗原CD2APAnti-CD32(FCGR2C) AntibodyRAS癌基因家族成員RAB37(RAB37)

桂花耳*CD33抗原(大、小鼠）Anti-CD37 AntibodyRAS癌基因家族成員RAB1A(RAB1A)

秦氏蜜環(huán)菌CD34抗原（表面的唾液粘蛋白）Anti-CD3EAP AntibodyRAR相關(guān)孤兒受體γ(RORγ)

芽孢桿菌CD38多肽（小鼠、大鼠）Anti-CD53 AntibodyRap鳥核交換因子1(RAPGEF1)

嗜中溫寒冷桿菌CD38抗原（人）Anti-CD81 AntibodyRalA結(jié)合蛋白1(RALBP1)

解淀粉芽孢桿菌CD36（多肽）Anti-CD84 AntibodyRaftlin2蛋白(RFTN2)

阿姆斯特丹曲霉CD7抗原Anti-CD98 AntibodyRAD54樣蛋白2(RAD54L2)

解角質(zhì)微桿菌CD40L抗原Anti-CD93 AntibodyRAD51同源物(RAD51)

大腸桿菌CD44抗原 (多肽抗原)Anti-CD97 AntibodyRAD23同源物B(RAD23B)

斐濟(jì)球腔菌抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3Anti-CD70 AntibodyRAD1同源物(RAD1)

淡紫擬青霉醋促生長(zhǎng)激釋放肽2Anti-CD99 AntibodyRac-GTP激活蛋白1(RACGAP1)

假單胞菌屬醋促生長(zhǎng)激釋放肽6Anti-CDC14A AntibodyRab親和蛋白3A(RPH3A)

嗜麥芽寡單胞菌五勝肽/美容肽—M肽Anti-CDC16 AntibodyRabconnectin3蛋白(RC3)

聚生殼菌醋美拉諾坦IIAnti-CDC23 AntibodyRAB11家族相互作用蛋白3(RAB11FIP3)

組蛋白精甲基轉(zhuǎn)移5抗體耐硼賴芽孢桿菌大鼠腎足細(xì)胞

腫瘤錯(cuò)配修復(fù)基因PMS1抗體少動(dòng)鞘單胞菌人T淋巴細(xì)胞系

原鈣粘蛋白γA7抗體Acidovoraxsp.人骨髓瘤細(xì)胞

原鈣粘蛋白γA8抗體不動(dòng)桿菌屬人胰腺癌細(xì)胞
Bax誘導(dǎo)凋亡抑制劑高滲曲霉鄰苯游離狀腺原

臭曲霉鄰甲苯游離甲狀腺

意外鏈霉 2-并咪唑促甲狀腺

乳桿屬 2-茚酮環(huán)形泰勒蟲IgM抗體

枯草芽胞桿 5-甲基環(huán)形泰勒蟲IgA抗體

類腸膜魏斯氏二烯基鹽鹽戊糖

安妥檢測(cè)試紙（鼠藥）鄰甲苯異酯硫氧還蛋白還原

血紅栓鄰苯氧乙血管緊張轉(zhuǎn)化

葡酒色傘枝霉苯甲酰透明質(zhì)

島生異擔(dān)子 2-萘基溴甲基酮多巴

網(wǎng)狀鐮孢 4,4'-二甲基聯(lián)苯嘔吐霉

乳白栓孔 5-溴-2-氨基噻唑氫鹽M1

芽胞桿 (S)-3-氨基-1,2-

郝氏青霉 2-喹啉流行熱病

福山假絲酵母 3-甲基喹啉精
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)