Rho抑制劑（Rhosin鹽酸鹽）-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10908

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Rho抑制劑（Rhosin鹽酸鹽）

英文名稱：Rhosin hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg

貨號(hào)：FS-X10908

產(chǎn)品介紹:

Rhosin鹽酸鹽是Rho特異性抑制劑，結(jié)合WT RhoA的Kd值為0.4uM，對(duì)Cdc42和Rac1作用無(wú)。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1281870-42-5

純度：99.98%

分子量：394.86

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

檸檬兩面神菌人超敏前列腺特異性抗原Anti-TTC23 Antibody人彈性蛋白(ELN)

廣食黃桿菌人諾龍/去甲睪Anti-TTC37 Antibody人套膜蛋白(iNV)

喀斯特盤孢大鼠纖連蛋白Anti-TUBA3C Antibody人套膜蛋白(iNV)

黑曲霉人16α羥基雌1Anti-TUBGCP3 Antibody人肌腱蛋白R(shí)(TN-R)

擴(kuò)展青霉大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子Anti-TTK Antibody人肌腱蛋白R(shí)(TN-R)

靈芝屬大鼠骨成型蛋白受體ⅡAnti-TTN Antibody人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP-43)

科羅拉多擬無(wú)枝菌人Anti-TUBGCP3 Antibody人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP-43)

紅樹林小單孢菌人糖皮質(zhì)激受體βAnti-TUBGCP4 Antibody人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)

球孢白僵菌大鼠骨成型蛋白受體1AAnti-TUBGCP4 Antibody人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)

柳樹爛皮病人糖皮質(zhì)激受體αAnti-TUBGCP5 Antibody人聚集蛋白(Agrin)

橙黃鵝膏菌（不可訂購(gòu)）大鼠骨成型蛋白4Anti-TUBGCP5 Antibody人聚集蛋白(Agrin)

枯草芽孢桿菌大鼠骨成型蛋白2Anti-TUBGCP6 Antibody人Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)

賴芽胞桿菌屬人高敏狀腺原Anti-TUBGCP6 Antibody人Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)

褐囊蜜環(huán)菌大鼠心臟脂肪結(jié)合蛋白Anti-TUFM Antibody人膜輔蛋白(MCP/CD46)

枯草芽孢桿菌大鼠膽囊收縮/縮膽囊八肽Anti-TUSC3 Antibody人膜輔蛋白(MCP/CD46)

假單孢菌大鼠環(huán)加氧2Anti-TUFM Antibody人延伸蛋白A(EloA)

泛蛋白連接C抗體弗蘭克氏菌抗CEA小鼠7

泛蛋白連接Q1抗體虎奶菇雜交瘤細(xì)胞抗CD2

泛蛋白連接U抗體短裙竹蓀5號(hào)雜交瘤(抗CD3)

泛載體蛋白L6抗體寄生疫霉雜交瘤細(xì)胞抗AChE
Rho抑制劑（Rhosin鹽酸鹽）平臍蠕孢鋁、鉍、鈷、鎂、釩/Al, Bi, Co, Mg, V酮體

鞘氨單胞 2-氨基-4-苯硫V

鋁、鉍、鈷、鎂、釩/Al, Bi, Co, Mg, V半胱蛋白-8

豌豆根瘤 2-溴-4-氟苯CD83

類銀白紫絲膜 2-溴噻吩干擾調(diào)節(jié)因子7

竹針孢座囊 2,5-吡啶二羧干擾-λ3

鈍齒棒桿鋁、銅、鐵、錳、鋅/Al, Cu, Fe, Mn, Zn谷

Hymenobacter mucosus 鋁、鈹、鉻、銻、錫/Al, Be, Cr, Sb, Sn受體酪激AXL

肉色栓二化鉑維生D25羥化

大腸埃希銀、汞、鉬、鈉、硒/Ag, Hg, Mo, Na, Se色P450家庭成員27A1

星形擬盤多毛孢 (S)-3-吡咯烷色P45027B1

曲霉鈰、鈷、鋰、鈧、、釔 /Ce, Co, Li, Sc, Tl, Y色P4502J2

金產(chǎn)色鏈霉 N-乙酰乙二1,25-二羥維生D(3)24-羥化，線粒體

根瘤鈷、鍺、銦、鋰、、釔 /Co, Ge, In, Li, Tl, Y偽狂犬病GB抗原

淡紫擬青霉鈰、鈷、鋰、鈧、、釔/Ce, Co, Li, Sc, Tl, Y偽狂犬病GE抗原
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)