硫氧還蛋白-1（Trx-1）抑制劑(PX-12)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X11017

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：硫氧還蛋白-1（Trx-1）抑制劑(PX-12)

英文名稱：PX-12

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X11017

產(chǎn)品介紹:

PX-12(IV-2)是可逆的硫氧還蛋白-1（Trx-1）抑制劑;抑制MCF-7和HT-29cells細(xì)胞生長(zhǎng)的IC50值分別為1.9和2.9μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：141400-58-0

別名：IV-2

純度：99.58%

分子量：188.31

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

假乙熱厭氧桿狀菌Pseudomonas luteola大鼠血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)

死亡谷芽孢桿菌Pseudomonas luteola大鼠黑色抗體(MC Ab)

枯草芽孢桿菌Pseudomonas marginalis大鼠黑色抗體(MC Ab)

小紅酵母Pseudomonas marginalis大鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)

紅皮堿線菌Pseudomonas marginalis大鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)

污黑腐皮殼Pseudomonas marginalis大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)

團(tuán)炭角菌Pseudomonas marginalis大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)

球孢白僵菌Pseudomonas marginalis pv. margnalis大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)

地衣形芽孢桿菌Pseudomonas marginalis pv. margnalis大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)

根癌土壤桿菌Pseudomonas marginalis pv. alfalfa大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)

芽孢桿菌Pseudomonas marginalis pv. pastinacae大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)

解藻弧菌Pseudomonas marginalis大鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)

液化根霉Pseudomonas marginalis pv. pastinacae大鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)

三葉草根瘤菌Pseudomonas marginata大鼠卵泡抑(FS)

灰褐鏈霉菌Pseudomonas mendocina大鼠卵泡抑(FS)

芽胞桿菌Pseudomonas mendocina大鼠組織蛋白去乙?；?HD)

一種腫瘤抑制基因抗體C端葉點(diǎn)霉屬一氧化氮(NO)比色法測(cè)試盒

血小板活化因子受體抗體農(nóng)業(yè)微生物菌種農(nóng)業(yè)微生物菌種農(nóng)業(yè)微生物菌種亞硝鹽比色法測(cè)試盒

干擾誘導(dǎo)蛋白p58ipk抗體異型酒香酵母總(T-GSH)/氧化型(GSSG)比色法測(cè)試盒

抑制/腫瘤抑制因子抗體忍冬木層孔菌總抗氧化能力(T-AOC)比色法測(cè)試盒(ABTS催化法)
硫氧還蛋白-1（Trx-1）抑制劑(PX-12)鏈霉澤瀉 K 23-醋酯

草木樨中華根瘤 11-去氧澤瀉B

蠟樣芽孢桿 1,3,5-三羥基咕噸酮

掘氏疫霉* 1,3,7-三羥基-9H-氧雜蒽-9-酮

黃曲霉藍(lán)V

果生鏈核盤 13-羥基氧化小檗堿

泡盛曲霉魯諾單鈉鹽

櫟生青霉 3-O-阿魏酰奎尼

長(zhǎng)柄鏈格孢二甲苯藍(lán)FF

阿維鏈霉 4-O-阿魏?？?/span>

鼠傷門氏苦參C

黑木耳苦參X

硬結(jié)節(jié)桿 7,3'-二羥基-5'-甲氧基異黃酮

金龜子綠僵苦參E

毛頭鬼傘 cis-宮部苔草C
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)