procaspase-3激活劑(PAC-1)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10913

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：procaspase-3激活劑(PAC-1)

英文名稱：PAC-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10913

產(chǎn)品介紹:

PAC-1是一種procaspase-3激活劑，誘導(dǎo)癌細胞凋亡，EC50為2.08μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：315183-21-2

別名：Procaspase activating compound 1

純度：95.98%

分子量：392.49

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

尖孢鐮孢人游離狀腺原Anti-USP40 Antibody人髓磷脂堿性蛋白(MBP)

費比恩畢赤酵母人新生甲狀腺Anti-USP38 Antibody人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)

解脂亞羅酵母人胰島Anti-USP42 Antibody人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)

釀酒酵母人C肽Anti-USP45 Antibody人結(jié)蛋白(Des)

巴氏微桿菌人絨毛膜促性腺激Anti-USP42 Antibody人結(jié)蛋白(Des)

暗色環(huán)紋炭團菌人絨毛膜促性腺激βAnti-USP43 Antibody人S0蛋白(S-0)

origami 2(DE3)人促黃體激Anti-USP44 Antibody人S0蛋白(S-0)

印度洋兩面神菌人龍Anti-USP48 Antibody人S0B蛋白(S-0B)

金色鏈霉菌人瘦Anti-USP50 Antibody人S0B蛋白(S-0B)

地衣形芽孢桿菌人苗條受體Anti-USP45 Antibody人巨噬炎性蛋白2(MIP-2)

茄鏈格孢菌人生長激Anti-USP53 Antibody人巨噬炎性蛋白2(MIP-2)

麥芽糖假絲酵母人紅生成Anti-USP6NL Antibody人凝膠原蛋白(gelson)

根瘤菌人紅生成受體Anti-UTP14A Antibody人凝膠原蛋白(gelson)

地衣芽孢桿菌人β-微管蛋白Anti-VANGL1 Antibody人踝蛋白(talin)

枯草芽孢桿菌人前列腺F2αAnti-VAMP1 Antibody人踝蛋白(talin)

古巴栓孔菌人總前列腺特異抗原Anti-UTS2 Antibody人角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)

尾加壓2相關(guān)肽抗體多形炭角菌（斜面）人牙齦成纖維細胞

上調(diào)基因4抗體N端腐皮殼屬牛胚氣管細胞

B淋巴細胞前體蛋白1抗體灰略紅鏈霉菌新生牛睪丸支持細胞系

血管非炎性蛋白2抗體維及尼鏈霉菌外周血淋巴細胞
procaspase-3激活劑(PAC-1)孔狀短小莖點霉鎘、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉛、鋅/Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Zn基質(zhì)金屬蛋白2

蠟狀芽孢桿鎘、鈷、鉻、銅、鐵、汞、鎳、鋅/Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Hg, Ni, Zn血管內(nèi)皮生長因子A

巨型艾美耳球蟲鈣、銅、鐵、、鎂、錳、鈉、鋅/Ca, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, Zn血管內(nèi)皮生長因子C

產(chǎn)堿假單胞鉍、鎵、鍺、銦、錸、銻、硒、碲/Bi, Ga, Ge, In, Re, Sb, Se, Te血管內(nèi)皮生長因子受體1

香菇鉍、銅、銦、鉬、鎳、錸、銻、碲/Bi, Cu, In, Mo, Ni, Re, Sb, Te血管內(nèi)皮生長因子受體3

栗疫鉍、銅、鐵、鉛、鈀、銻、錫、碲/Bi, Cu, Fe, Pb, Pd, Sb, Sn, Te核因子κB

馬克斯克魯維酵母鉍、銅、鐵、鉛、鈀、銻、硒、碲/Bi, Cu, Fe, Pb, Pd, Sb, Se, Te磷化組蛋白

香蕉* 鉍、鍺、銦、鋰、镥、銠、鈧、鋱/Bi, Ge, In, Li, Lu, Rh, Sc, Tb鐵蛋白

枯草芽孢桿鋇、鈣、、鋰、鎂、鈉、、鍶/Ba, Ca, K, Li, Mg, Na, NH4, Sr絲裂原活化蛋白激

釀酒酵母、鎵、鋰、鉛、銻、鍶、、鋯/B, Ga, Li, Pb, Sb, Sr, Tl, Zr淀粉樣前體蛋白

大腸埃希氏砷、鈷、鉻、汞、鉛、硒、鋅/As, Co, Cr, Hg, Pb, Se, Zn促甲狀腺

毛柄(金針菇) 砷、鎘、鉻、銅、鐵、錳、鉛、鋅/As, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Pb, Zn一磷腺

嘴突凸臍蠕孢砷、鎘、鉻、銅、鐵、錳、鉛、鋅/As, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Pb, Zn白介1α

白僵鋁、鈣、鐵、鎂、、鈉、磷、鈦/Al, Ca, Fe, Mg, K, Na, P, Ti卵母成熟抑制因子

枯草芽孢桿鋁、鈣、鉻、銅、錳、鈉、鎳、鋅/Al, Ca, Cr, Cu, Mn, Na, Ni, Zn酪
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)