當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> AMP活化蛋白激酶激活劑(AMPK激活劑)
貨號 | FS-X10283 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:AICAR 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg AICAR是一種AMP活化蛋白激酶(AMPK)激活劑,下調(diào)HepG2細(xì)胞中的胰島素受體表達(dá)。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:2627-69-2 別名:Acadesine;AICA Riboside 純度:99.84% 分子量:258.23 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:AICAR
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X10283
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
香菇乙/植物生長單克抗體Human PYCR2 原鈣黏1(PCDH1)
山綠豆根瘤菌白介4受體抗體IL-4RαHuman PTGES3(Prostaglandin E synthase 3) 1(PRM1)
Algoriphagus白介2受體γ鏈抗體Human QKI 誘導(dǎo)型一氧化合成(iNOS)
深綠色木霉白介1受體1抗體Human QPRT(Quinolinate phosphoribosyltransferase) 誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)
淺黃隱球酵母白介1受體2抗體Human PURA 有絲分裂原活化蛋白激14(MAPK14)
微球菌白介20受體α鏈抗體Human PUS1 游離脂肪(FFA)
化膿性鏈球菌白介20受體β鏈抗體Human PVRIG 游離原卟啉(FEP)
康寧木霉乙抗體/植物生長抗體Human PUS3 游離血紅蛋白(f-Hb)
枝芽胞桿菌整合α6抗體Human PTPRR 游離狀腺原(Free-T3)
大球蓋菇擬南芥IKI3抗體Human PVRL3/Nectin 3 游離肉堿(Free Carnitine)
曲霉白介5抗體Human PTPRS 游離前列腺特異性抗原(fPSA)
松口蘑白介-1受體相關(guān)激1抗體Human PURA 游離甲狀腺(FT4)
巴斯德畢赤酵母整合α5抗體Integrin α5Human PUS1 游離睪(F-TESTO)
平滑假絲酵母整合β1/Integrin β1抗體Human PUS3 游離蛋白S(FP-S)
糙皮側(cè)耳整合αVβ3抗體Human PTPRZ1(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase zeta) 游離雌三(FE3)
孢籃狀菌胰島樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體Human PVRIG 游離β絨毛膜促性腺激(f-βhCG)
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)哈巴
麥克姆多類芽孢八疊球菌Paenisporosarcina│macmurdoensis 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記哈巴俄
吉林?jǐn)S孢酵母Sporobolomyces│jilinensis 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記香蒲新
AMP活化蛋白激酶激活劑(AMPK激活劑)莢膜紅細(xì) N-烯基咪唑四氫生物蝶呤
微桿屬 5-氧代己蛋白質(zhì)羥基
辣椒盤孢 乙基磷?;叶柞ヌO果脫氫
橙鱗傘8 葡萄醣庚鈉膽囊收縮;縮膽囊八肽
大腸埃希氏 3--6-硝基吲唑Noggin
橙灰紫旋鏈霉 2,4-二溴丁甲酯血小板內(nèi)皮粘附分子6
腸沙門氏腸亞種波恩血清型 苯甲砜可溶性鳥環(huán)化
地衣芽孢桿 基溴化锍克拉拉蛋白
甲速測管 三羥甲基烷三縮水甘油膽固?;D(zhuǎn)移
茶藨子葡萄座腔 2--5-(三氟甲基)溴芐中性粒胞外誘捕網(wǎng)絡(luò)
弗雷德里克斯堡假單胞 4-吡唑3羥基3甲基戊二酰合1
豇豆慢生根瘤 鄰氟芐
聚生殼 異芐酯連蛋白抗體
黑曲霉 2-甲氧基吡血小板衍生生長因子β受體
有柄樹舌 磺酰硒蛋白P
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