PDK1抑制劑(GSK2334470)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10584

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：PDK1抑制劑(GSK2334470)

英文名稱：GSK2334470

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10584

產(chǎn)品介紹:

GSK2334470是高效特異性的的PDK1抑制劑，IC50值為10nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1227911-45-6

純度：99.87%

分子量：462.59

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Achromobacter piechaudii粘結(jié)蛋白SA2抗體Anti-PIAS4 Antibody跨膜4域亞家族A成員1(MS4A1)

深綠木霉染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體Anti-PICALM Antibody扣帶蛋白(CGN)

棒桿菌粘結(jié)蛋白SA1抗體Anti-PIAS4 Antibody克拉拉蛋白16(CC16)

木腐裂褶病菌紡錘體點(diǎn)構(gòu)成蛋白25抗體Anti-PIGR Antibody可溶性半乳糖凝集3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)

毛韌革菌滋養(yǎng)層糖蛋白5T4抗體Anti-PIGR Antibody可溶性半乳糖結(jié)合凝集16(LGALS16)

邊緣假單胞菌防風(fēng)致病變種磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體Anti-PIK3CA Antibody(COR)

Compostimonas磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體Anti-PIK3CB Antibody顆粒M(GZMM)

球孢白僵菌磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體Anti-PIK3CA Antibody顆粒K(GZMK)

香菇(神農(nóng)5號)唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集14抗體Anti-PIK3R2 Antibody顆粒H(GZMH)

黃柄曲霉分泌受體抗體Anti-PIK3R1 Antibody顆粒B(GZMB)

史氏芽孢桿菌肌聚多糖-β抗體Anti-PIN1 Antibody顆粒A(GZMA)

Erwinia persicina 磷化非受體型酪蛋白激抗體Anti-PIK3R2 Antibody人抗內(nèi)膜抗體(Anti-EMAb)

頭狀莖點(diǎn)霉磷化非受體型酪蛋白激抗體Anti-PIM1 Antibody人抗中性粒顆?？贵w(ANEA)

金針菇分泌型免疫球蛋白A抗體Anti-PINK1 Antibody人抗增殖核抗原(PCNA)

頂黑毛殼S期激相關(guān)蛋白2抗體Anti-PKCmu(PRKD1) Antibody人抗增生抗體靶分子1(TAPA1)

出芽短梗霉(黑酵母）蛇蛋白抗體（中華眼鏡蛇）Anti-PINX1 Antibody人抗載脂蛋白抗體(AAHA)

螺旋環(huán)螺旋蛋白2抗體蝙蝠蛾擬青霉人食管癌組織源細(xì)胞提取物

絲/蘇蛋白激Nek3抗體友好戈登氏菌人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞提取物

天冬蛋白ASP4抗體卡門柏青霉人表皮黑色細(xì)胞提取物

核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白3抗體肯塔基沙門氏菌人脂肪細(xì)胞提取物
PDK1抑制劑(GSK2334470)惡臭假單胞 5-溴-2-甲氧基嘧啶還原

球孢白僵 4-甲基-2-甲硫基嘧啶性磷

多欄純潔桿 1,2-二(二苯基磷基)苯過氧化氫

廣食黃桿 N-(2-羥基乙基)乙二-N,N'N'-三乙鈉堿性磷

人參布哈加瓦氏環(huán)磺?；钚匝醮?/span>

成團(tuán)泛 4-巰基尿組織蛋白

球毛殼 CandesartanNa-K-ATP

釀酒酵母四氨合化鈀一水合物 (metals basis), Pd 39% min酯同工

豇豆慢生根瘤 2-乙烷基-3,5-二甲基吡賴

雞傷門氏 1-萘凋亡因子

細(xì)鏈格孢三氟甲基磺鉺(III)蛋白激G

豇豆慢生根瘤三氟磺鏑谷

雙歧雙歧桿 1,3-二異基咪唑海藻糖

產(chǎn)紫青霉 4-溴-2-甲氧基甲酯蛋白激A

保亭油脂酵母 2-溴-3-十二烷基噻吩端粒
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)