TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10851

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)

英文名稱：SD-208

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10851

產(chǎn)品介紹:

SD-208是一種選擇性的TGF-βRI(ALK5)抑制劑，IC50值為48nM，對其選擇性是對TGF-βRII的10倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：627536-09-8

純度：98.33%

分子量：352.75

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

雕刻擬盤多毛孢大鼠Ⅷ相關(guān)抗原Anti-POLA1 Antibody人血管舒緩激肽(BK)

奇異球菌屬大鼠IXAnti-Pogz Antibody人血管舒緩激肽(BK)

海水甲基桿菌小鼠碳酐Anti-POLB Antibody人肌球蛋白輕鏈(MLC)

高盧蜜環(huán)菌人P53Anti-POLB Antibody人肌球蛋白輕鏈(MLC)

千葉鏈霉菌人周期D3Anti-POLD1 Antibody人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)

釀酒酵母大鼠ⅩAnti-POLD3 Antibody人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)

郝氏鏈霉菌小鼠降鈣基因相關(guān)肽Anti-POLD3 Antibody人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)

香菇8人周期D2Anti-POLDIP3 Antibody人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)

松杉靈芝小鼠胃動Anti-POLE Antibody人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)

苜蓿中華根瘤菌大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子Anti-POLE Antibody人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)

芹側(cè)耳大鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物Anti-POLG2 Antibody人血清淀粉樣蛋白A(SAA)

假堅強芽孢桿菌小鼠生長抑Anti-POLE4 Antibody人血清淀粉樣蛋白A(SAA)

鏈霉菌人周期D1Anti-POLK Antibody人熱休克蛋白60(Hsp-60)

釀酒酵母人內(nèi)皮抑Anti-POLI Antibody人熱休克蛋白60(Hsp-60)

紅蠟盤菌小鼠血纖蛋白原Anti-POLR1B Antibody人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)

芽孢桿菌大鼠凝血抗凝血復(fù)合物Anti-POLQ Antibody人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)

轉(zhuǎn)化性卷曲含蛋白質(zhì)2地錘菌屬人青光眼小梁網(wǎng)細胞

微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體茄腐皮鐮刀菌大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞

腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5褐赤刺革菌人神經(jīng)母細胞瘤細胞

腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2TNFα-IP2抗體肉座菌屬人皮膚鱗癌細胞
TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)硬結(jié)節(jié)桿 RaKa-Ray培養(yǎng)基葡萄糖依賴性胰島釋放多肽

蛇孢霉屬 3-氨基-4-基吡唑葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2

發(fā)酵畢赤酵母 HC瓊脂基礎(chǔ)前列環(huán)

冬蟲夏草改良LETHEEN瓊脂基礎(chǔ)前列腺E2

*林肯鏈霉 [2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙羥甲基戊二單酰

金黃色葡萄球金黃亞種 TAT肉湯熱休克蛋白20

檸檬色游動球 YNB培養(yǎng)基熱休克蛋白70

葉點霉屬去氧膽鹽枸櫞鹽瓊脂乳鐵蛋白

乳桿屬 3,4,7,8-四甲基-1,-菲羅啉狀腺原

柔嫩艾美耳球蟲葡萄球選擇性瓊脂1三葉因子3

羅丹塞伯林德納氏酵母甘露卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)色上皮衍生因子

粉紅寄生改良Giolitti-Cantobi肉湯腎上腺

香菇 (R)-(+)-碳烯酯生長分化因子9

雙氮纖維單胞 TMP瓊脂培養(yǎng)基生長

變天藍鏈霉 EF-18瓊脂生長釋放肽
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)