H-89(PKA抑制劑)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10244

中文名稱：H-89(PKA抑制劑)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1mg|5mg

貨號：FS-X10244

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1mg|5mg

H89 2HCl 是一種有效的PKA 抑制劑，Ki 為48 nM，作用于PKA 比作用于PKG 選擇性高10倍，比作用于PKC， MLCK，鈣調(diào)蛋白激酶II 和酪蛋白激I/II 選擇性高500倍。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

密歇根克雷伯氏菌滋養(yǎng)層抗原3β7抗體Human SLC16A12 大鼠D-乳免疫試劑盒

平田頭菇熱休克蛋白-22抗體Human SLC16A3 大鼠D-甘油3-磷免疫試劑盒

硒砷芽孢桿菌組織H4受體抗體Human SLC16A2 大鼠D二聚體(D2D)免疫試劑盒

裴氏著色霉羥基類固脫氫11β2抗體Human SLAMF7 大鼠DNA甲基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)免疫試劑盒

釀酒酵母組織H3受體抗體Human SLC10A3 大鼠C型鈉尿肽(CNP)免疫試劑盒

瑞山海源菌磷化組蛋白H1抗體Human SLC12A2(Solute carrier family 12 member 2) 大鼠C肽(C-Peptide)免疫試劑盒

圍小叢殼扁圓變種HEATR4蛋白抗體Human SLC12A4 大鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒

栗疫菌透明質(zhì)及粘蛋白1抗體Human SIX4 大鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)免疫試劑盒

新城疫病轉(zhuǎn)錄因子HES7抗體Human SIX2 大鼠CXC趨化因子受體4(CXCR4)免疫試劑盒

尖鐮孢古巴?；蛯m頸黏液蛋白相關(guān)蛋白抗體Human SLC13A4 大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)免疫試劑盒

玫瑰色紅球菌流感病H3N8血凝抗體Human SKAP2 大鼠c-ros致癌基因1,受體酪激(ROS1)免疫試劑盒

運動節(jié)桿菌流感病H3N7血凝抗體Human SIX5 大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)免疫試劑盒

Rhizobium multihospitium流感病H3N1血凝抗體Human SKIL 大鼠c-jun 免疫試劑盒

黑曲霉同源盒蛋白HoxB3抗體Human SIX4 大鼠c-fos 免疫試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭菌 D型遺傳性血色病蛋白相關(guān)蛋白1抗體Human SIX5 大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-磷3磷脂酰轉(zhuǎn)移,線粒體(PGS1)免疫試劑盒

紋黑蛋巢甘油吸收/轉(zhuǎn)運蛋白GUP1抗體Human SKAP2 大鼠CDCP1 免疫試劑盒

涅斯捷連科氏菌Nesterenkonia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=4%科羅索

枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis (Ehrenberg) Cohn 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99%草質(zhì)

芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,97.5%異鼠李-3-O-葡萄糖
H-89(PKA抑制劑)枯草芽胞桿 3-氨基-4-氟甲酯ERp57

枯草芽孢桿 2-氟脂褐

大孢鏈霉 5-降烯-2,3-二羧一甲酯心型脂肪結(jié)合蛋白

近弧狀短波單胞鉛(II)BPDE-DNA加合物

根瘤 1--3-乙氧基烷周期依賴性激2

秦氏蜜環(huán) 順-4-氨基環(huán)己烷甲可溶性β淀粉樣蛋白

鏈球?qū)?/span> 4-氨基-3-溴喹啉不可溶性β淀粉樣蛋白

艱難鏈霉 3-氧代-3,4-二氫-2-喹喔啉甲乙酯雷帕霉靶蛋白

紅球 4-氨基鄰苯二甲酰亞單氧化B

大腸埃希 4-氟-1,2-苯二腸道病71型IgG抗體

唐菖蒲伯克霍爾德氏 6--1,2,3,4-四氫咔唑蛋白酪磷抗體

尾孢屬 2--3,5-二氟苯甘油磷

釀酒酵母 3-氨基-5-甲基己過氧化氫

小鏈霉(小諾卡氏) N-(2,3,4-三氟苯)乙酰苯抗雙鏈DNA-IgG抗體

總狀橫梗霉陽離子桃紅FG抗雙鏈DNA-IgM抗體

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