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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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泛WNK-kinase抑制劑(WNK463)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-18 16:29:23瀏覽次數(shù):170次

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貨號(hào) FS-X10586
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SATB1(special AT-rich sequence binding protein) 核質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗原1,2- GR,99.5%
SCF (Stem Cell Factor) 干生長(zhǎng)

中文名稱:WNK-kinase抑制劑(WNK463)

英文名稱:WNK463

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào):FS-X10586

產(chǎn)品介紹:

WNK463是一個(gè)生物的泛WNK-kinase抑制劑。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):2012607-27-9

純度:99.72%

分子量:463.46

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

褐孢大禿馬勃基質(zhì)衍生因子4抗體(鈣結(jié)合蛋白)Anti-PLAUR Antibody人抗凝血(AT)

多根硬皮馬勃肝癌蛋白剪接變異體蛋白抗體Anti-PLAUR Antibody人抗內(nèi)因子抗體(AIFA)

大腸埃希氏桿菌結(jié)腸癌抗原8抗體Anti-PLAUR Antibody人抗繆勒管激(AMH)

側(cè)耳T淋巴識(shí)別的鱗狀癌SART3抗體Anti-PLCB1 Antibody人抗抑制因子1(AZIN1)

孔球孢霉磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體Anti-PLAUR Antibody人抗麥膠蛋白(AGA)

熱帶根瘤菌血清學(xué)定義結(jié)腸癌抗原1抗體Anti-PLCG2 Antibody人抗利尿激(ADH)

重金屬鉛速測(cè)試劑包信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體Anti-PLD1 Antibody人抗性磷(ACP5)

粗皮馬勃磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體Anti-PLEXINA2 Antibody人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA)

谷棒桿菌結(jié)腸癌抗原10抗體Anti-PLD2 Antibody人抗甲基乙二抗體(AMA)

四川散斑殼核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體Anti-PLG Antibody人抗肌蛋白(UTRN)

遼寧盤孢膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FP1抗體Anti-PLEC Antibody(PB0420)人抗核糖體抗體(Anti-rRNP)

大腸埃希氏菌階段特異性胚胎表面抗原-3抗體Anti-PLG Antibody人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA)

昆明假諾卡氏菌原癌基因18家族STMN3蛋白抗體Anti-PLG Antibody人抗核糖核蛋白抗體(Anti-RNP)

球孢鏈霉菌球孢亞種階段特異性胚胎表面抗原4抗體Anti-PLIN1 Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(AGPA)

寒冷桿菌骨架相關(guān)蛋白抗體Anti-PLIN1 Antibody人抗谷脫羧抗體(Anti-GAD)

馬賽博斯氏菌磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體Anti-PLIN1 Antibody人抗肝腎微粒體抗體(Anti-LKMA)

核仁蛋白8抗體德氏乳桿菌乳亞種人牙周膜成纖維細(xì)胞提取物

核孔復(fù)合體蛋白88抗體食丁芽孢桿菌人食管癌組織源成纖維細(xì)胞提取物

豆蔻?;D(zhuǎn)移1抗體灰色鏈霉菌銹色變種人胃癌組織源成纖維細(xì)胞提取物

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3抗體鮭色鎖擲酵母人胰腺癌組織源細(xì)胞提取物
WNK-kinase抑制劑(WNK463)大豆慢生根瘤 果糖

亞美尼亞鏈霉 5-苯基-2-糠蛋白激B

芽孢桿屬 3-氨基 磷化蛋白激B

鞘氨單胞 2-異氧基苯叉頭轉(zhuǎn)錄因子

皺褶假絲酵母 化鋱,六水磷化叉頭轉(zhuǎn)錄因子

解淀粉芽胞桿 6,7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮20羥基蛻皮

紅城紅球 4--6,7-二甲氧基喹唑啉糖原合成激3β

釀酒酵母 (S)-(-)-2-氨基-2'-羥基-1,1'-聯(lián)萘酪

金黃節(jié)桿 二二氨鈀αS轉(zhuǎn)移

黑木耳 硫銩(III) 八水合物NADPH氧化

大腸埃希氏(大腸桿) 硝銅水合物磷脂酰肌三羥基激

康寧(氏)木霉 六氟鋁鈉AKT蛋白

微桿屬 氟化釓(III)脯羥化

蠟狀芽孢桿 氟化銪(III)異檸檬脫氫

枯草芽孢桿 氟化釤α酮戊二

 


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