Src激酶家族抑制劑(SU6656)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X11011

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Src激酶家族抑制劑(SU6656)

英文名稱：SU6656

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X11011

產(chǎn)品介紹:

SU6656是Src激酶家族抑制劑，對(duì)Src、Yes、Lyn和Fyn的IC50值分別為280、20、130和170nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：330161-87-0

純度：98.24%

分子量：371.45

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

香菇Pseudomonas chlororaphis大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)

枯草芽孢桿菌枯草亞種Pseudomonas chlororaphis大鼠抗內(nèi)皮抗體(AECA)

微球菌Pseudomonas azotoformans大鼠抗內(nèi)皮抗體(AECA)

馬勃狀硬皮馬勃Pseudomonas chlororaphis大鼠全段甲狀旁腺(i-PTH)

擬隱孢殼屬Pseudomonas chlororaphis大鼠全段甲狀旁腺(i-PTH)

炭疽芽胞桿菌Pseudomonas chlororaphis大鼠牛小腸堿性磷(CIAP)

雜17Pseudomonas chlororaphis大鼠牛小腸堿性磷(CIAP)

類諾卡氏菌屬Pseudomonas chlororaphis大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)

深褐芽孢桿菌Pseudomonas chlororaphis大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)

華農(nóng)產(chǎn)黃細(xì)菌Pseudomonas cichorii大鼠克拉拉蛋白(CC16)

豬肺炎支原體（可訂購）Pseudomonas chlororophis大鼠克拉拉蛋白(CC16)

土生叢毛單胞菌Pseudomonas cichorii大鼠腎上腺(EPI)

假單胞菌Pseudomonas chlororophis大鼠腎上腺(EPI)

靈芝Pseudomonas cichorii大鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)

總狀毛霉Pseudomonas corrugata大鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)

假長(zhǎng)雙歧桿菌假長(zhǎng)亞種Pseudomonas corrugata大鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)

piwi樣1蛋白抗體檸檬色短小桿菌性磷(ACP)比色法測(cè)試盒

血小板源性生長(zhǎng)因子-B抗體蠟質(zhì)芽孢桿菌堿性磷(ALP)比色法測(cè)試盒

血小板源性生長(zhǎng)因子受體A抗體PDGFRα淀粉液化芽孢桿菌肌激(CK)比色法測(cè)試盒

色上皮源性因子抗體冬青節(jié)桿菌氫-鉀ATP比色法測(cè)試盒
Src激酶家族抑制劑(SU6656)產(chǎn)氣莢膜梭 C型 1-萘-4-磺鈉

大腸埃希氏草酰乙酯

木耳951 4-(三氟甲基)苯甲

表皮葡萄球 25-脫氫升麻 3-O-beta-D-木糖

葡萄汁酵母 2,4-二甲基吡咯

沙福芽孢桿 6-羥基 3,6,7-三葡萄糖

戴爾福特 5-羥色鹽鹽

枯草芽孢桿 5,6,7,4'-四羥基黃酮 6,7-二葡萄糖

拉曼傘形霉 4-乙基-2-甲氧基

猴頭白花前胡香豆精I(xiàn)I

突尼斯葉桿對(duì)香豆

大腸埃希白花前胡香豆精I(xiàn)

球孢鏈霉復(fù)合穩(wěn)定劑APD

玫煙色棒束孢姜狀三七R1

大腸埃希氏復(fù)合穩(wěn)定劑DPD
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)