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貨號 | FS-X10773 |
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中文名稱:CDK廣譜抑制劑
英文名稱:Flavopiridol Hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10773
產(chǎn)品介紹:
Flavopiridol Hydrochloride是一種CDK的廣譜抑制劑,與ATP競爭性地抑制CDK1,CDK2和CDK4的活性,IC50值分別為30,170,100nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:131740-09-5 別名:HL 275;NSC 649890;MDL 107826A;FLAVOPIRIDOL HCL;Alvocidib Hydrochloride 純度:98.95% 分子量:438.3 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
柴油食烷菌(親和純化) 牛IgGAnti-ISL2 Antibody人抗型肝炎病抗體(anti-HCV)
細麗外擔菌熒光標記牛血清白蛋白Anti-ITGA2 Antibody人抗型肝炎病抗體(anti-HCV)
核盤菌羅丹明標記牛血清白蛋白Anti-ITPKA Antibody人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)
Phaeobotryon羅丹明標記狗IgMAnti-ITGAD Antibody人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)
Microbacterium halotolerans熒光Cy3標記狗IgMAnti-ITIH2 Antibody人單核增多性李斯特菌O((LLO)
釀酒酵母熒光PE標記狗IgGAnti-ITPK1 Antibody人單核增多性李斯特菌O((LLO)
黑曲霉兔抗熒光Anti-ITPKC Antibody人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)
巧克力糖霉菌羊IgGAnti-JAK2 Antibody人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)
黃曲霉辣根過氧化物標記羊抗人IgAAnti-ITPKB Antibody人腺相關(guān)病(AAV)
冠突曲霉熒光APC標記羊IgG(流式同型對照)Anti-JAK1 Antibody人腺相關(guān)病(AAV)
鞘單胞菌(加詞待譯)羅丹明標記Anti-JAK2 Antibody人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)
無花果曲霉(免疫親和純化)人IgMAnti-JAKMIP2 Antibody人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)
枯草芽孢桿菌兔抗HRPAnti-JAK3 Antibody人傷寒抗原(St-Ag)
秀珍菇(親和純化) 人IgGAnti-JAK2 Antibody人傷寒抗原(St-Ag)
短小芽孢桿菌(親和純化) 人分泌型IgAAnti-JAM A pY280 Antibody人類嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)
釀酒酵母生物化人IgGAnti-JMJD5 Antibody 人類嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)
環(huán)指蛋白40抗體匍匐放射毛霉或雅致放射毛霉HCMEC人心臟微血管內(nèi)皮細胞
環(huán)指蛋白8抗體李克犁頭霉(傘枝梨頭霉)人急性早幼粒白血病細胞
細胞衰老抑制基因蛋白抗體皮狀絲孢酵母大鼠垂體瘤細胞
中間絲相關(guān)蛋白抗體貝雷絲孢酵母人急性髓細胞性白血病細胞
CDK廣譜抑制劑肉色栓 半固體營養(yǎng)瓊脂低氧誘導因子-1α
擬莖點霉屬 麥芽汁培養(yǎng)基對氧磷1
冬蟲夏草 雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基多巴
莓實假單胞 遠藤氏瓊脂二氧化
豬丹絲 月桂基硫鹽蛋白胨肉湯-MUG肥大類胰蛋白
松杉靈芝 MFC肉湯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A
枯草芽孢桿 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B
根瘤 馬鈴薯葡萄糖水肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C
松鼠葡萄球 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D
曲霉 胰酪胨大豆多粘肉湯基礎(chǔ)分泌型球蛋白A
綠色木霉 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(SDB)鈣蛋白
草假單胞 CIN培養(yǎng)基鈣調(diào)磷調(diào)節(jié)蛋白1
黑曲霉 波爾頓選擇性肉湯甘油三酯
貓埃菲比體 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基肝化血漿總脂解
德爾布有孢酵母 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液肝結(jié)合性表皮生長因子
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