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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> LDHA抑制劑(GNE-140 racemate)
貨號(hào) | FS-X10589 |
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中文名稱(chēng):LDHA抑制劑(GNE-140 racemate)
英文名稱(chēng):GNE-140 racemate
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10589
產(chǎn)品介紹:
GNE-140racemate是一個(gè)LDHA抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1802977-61-2 別名:GNE 140 racemate;GNE140 racemate 純度:99.53% 分子量:499.04 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
香茅彎孢溶質(zhì)載體家族蛋白21成員1C1抗體Anti-POMT2 Antibody巨噬炎性蛋白1β(MIP1β)
空腸彎曲桿菌電壓門(mén)控鈉通道SCN3B蛋白抗體Anti-POMC Antibody巨噬炎性蛋白1α(MIP1α)
黃桿菌屬胞吐分泌蛋白Sec6抗體Anti-PON1 Antibody巨噬來(lái)源趨化因子(MDC)
棲熱菌屬神經(jīng)突觸13抗體Anti-PON1 Antibody巨噬集落激因子(MCSF)
薔薇痂圓孢霉多配體聚糖結(jié)合蛋白2抗體Anti-PON1 Antibody巨噬表達(dá)基因1蛋白(MPG1)
毛霉屬結(jié)合珠蛋白家族3A1抗體Anti-PON1 Antibody巨肌激(MCK)
皺褶莫氏黑粉菌抑癌基因SSDP2抗體Anti-PON1 Antibody靜止Q6硫基氧化1(QSOX1)
淺黃色假單胞菌磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體Anti-PON1 Antibody痙攣性截癱蛋白11(SPG11)
植物乳桿菌絲蛋白抑制劑B4抗體(鱗狀癌抗原)Anti-PON2 Antibody痙攣蛋白(SPAST)
燕麥?zhǔn)染鞴蟻喎N*鞘磷脂合成2抗體Anti-POR Antibody景天庚糖激(SHPK)
大果毛殼鯊烯環(huán)氧抗體Anti-POR Antibody特異性抗原2(SSFA2)
Actinomonospora芳基磺基轉(zhuǎn)移1抗體Anti-PON2 Antibody蛋白17(Sp17)
炭疽芽胞桿菌腫瘤相關(guān)抑制劑1抗體Anti-POR Antibody精脒/精N1-乙?;D(zhuǎn)移2(SAT2)
殺結(jié)節(jié)鏈霉菌硫酯1抗體Anti-POSTN Antibody精脒/精N1-乙酰基轉(zhuǎn)移1(SAT1)
大腸埃希菌內(nèi)臟脂肪組織源性絲蛋白抑制蛋白抗體Anti-POT1 Antibody精氧化(SMOX)
費(fèi)氏中華根瘤菌沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體Anti-POR Antibody(PB0780)精合(SMS)
P53誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體微泡菌屬小鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物
型肝炎非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體金雀兒根瘤蒼白桿菌小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
環(huán)指蛋白107抗體青枯假單胞菌(不提供)小鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞提取物
絲/蘇蛋白激NEK8抗體串珠鐮孢(斜面)小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞提取物
LDHA抑制劑(GNE-140 racemate)黑附球 Ru(bpy)2(mcbpy-O-Su-ester)(PF6)2γ-氨基丁轉(zhuǎn)氨
雙孢蘑菇 N-芐基-2-萘γ-氨基丁轉(zhuǎn)氨
瓊氏不動(dòng)桿 2',6'-二氟苯乙酮乙酰轉(zhuǎn)移
多主葡萄殼 2,7-二溴咔唑肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移
根瘤 2,4-二氟苯磺酰檸檬合成
豌豆根瘤 Fmoc-3-硝基-L-酪卵黃蛋白
淀粉鏈霉 N-[芴甲氧羰基]-D-色五氟甲基酯漆
褐色馬勃 2,3,6-三氟苯甲單氧化
黃棕鏈霉 4-羧基-3-苯雙氧化
Lasiodiplodia rubropurpurea Abacavir血凝;凝集
束叢鏈霉 2,6-二氟吡啶-3-糖基轉(zhuǎn)移
深粘紅酵母 N-叔丁基-十氫異喹啉-3(S)-甲酰尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移
達(dá)格斯坦鏈霉 1-溴-2-氟-4-苯原癌基因c-Met蛋白
玉蕈(真姬菇) 鹽度洛可溶性糖
煙管 4-溴-3-過(guò)氧化
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