MDM2抑制劑(RG7112)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10660

中文名稱：MDM2抑制劑(RG7112)

英文名稱：RG7112

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10660

產(chǎn)品介紹:

RG7112是臨床上第一個(gè)MDM2抑制劑，Kd值為11nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：939981-39-2

別名：RO5045337

純度：99.94%

分子量：727.78

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

火紅色紅曲菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody脫氫(CHDH)

白黃阮繼生氏菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody磷轉(zhuǎn)移1(CHPT1)

短芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2 Antibody/乙磷轉(zhuǎn)移1(CEPT1)

傘菌假單胞菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2B Antibody膽固-25-羥化(CH25H)

泡囊短波單胞菌FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNK1 Antibody單酰甘油脂肪(MGL)

雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)用抗原（國(guó)家參考品）膠體金標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-Wnt2b Antibody單酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移3(MOGAT3)

副短短芽孢桿菌堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2B Antibody單酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移2(MOGAT2)

少根根霉PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3 Antibody單酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移1(MOGAT1)

嗜熱脂肪地芽胞桿菌（Geobacillus stearothermophilus ）ATCC 7953 *Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT4 Antibody單鏈選擇性單功能DNA糖基化1(SMUG1)

豬瘟病間接ELISA抗體Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3A Antibody單核趨化蛋白4(MCP4)

細(xì)麗擬盤多毛孢Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3A Antibody單核趨化蛋白3(MCP3)

釀酒酵母PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT4 Antibody單核趨化蛋白2(MCP2)

花楸盤多毛孢APC標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT5A Antibody單核趨化蛋白1(MCP1)

果生鏈核盤菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT5A Antibody(PB0087)單核巨噬分化關(guān)聯(lián)蛋白(MMA)

厄氏菌羅丹明標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT7A Antibody戴帽蛋白肌Z系β(CAPZβ)

核盤菌FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT7B Antibody帶粘蛋白(ZAN)

前列腺性磷抗體黑根毛霉小鼠冠狀動(dòng)脈組織提取物

乳腺癌相關(guān)蛋白DRES17抗體隱甲藻小鼠牙乳頭組織提取物

輔肌動(dòng)蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體浮游球衣菌小鼠內(nèi)臟脂肪組織提取物

親環(huán)蛋白親環(huán)PPIB抗體Sphingobacteriumcomposti小鼠胎兒表皮組織提取物
MDM2抑制劑(RG7112)白僵 N,N-二甲基間羥基苯一氧化氮

玫瑰庫(kù)克氏 2-吡啶甲一氧化氮合成

葉居 2-吡羧胰島

茶褐針層孔叔丁基 2,2,2-三乙酰亞酯胰島樣生長(zhǎng)因子1

豕鏈球 (1R,2S)-(-)-反-2-苯基-1-環(huán)己胰高血糖

擬卵蓋鵝膏苯乙酰羧化

大腸埃希氏 4-甲氧基苯磺酰異檸檬裂解

鐮刀 4-羥基苯磺水合物抑制B

三葉草根瘤 4-羥基苯磺水合物硬脂酰去飽和

Chitinophaga pinensis 4-苯磺水合物硬脂酰去飽和1

墨西哥假黃單胞 2'-氟-4'-羥基苯乙酮游離脂肪

膠孢 4-苯磺酰誘導(dǎo)型NO合

居成團(tuán)玫瑰變色 4-甲硫基苯原纖維蛋白-1

豬鏈球分型血清參考品血清型 SS24 對(duì)叔丁苯孕酮

栗酒裂殖酵母 2-氨基-3-溴-4-載脂蛋白B100

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