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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> caspase8抑制劑(Z-IETD-FMK)
貨號(hào) | FS-X10775 |
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產(chǎn)品介紹:
Z-IETD-FMK是選擇性和細(xì)胞可滲透的胱天蛋白酶(caspase8)抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):210344-98-2 純度:98.0% 分子量:654.68 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Z-IETD-FMK
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg
貨號(hào):FS-X10775
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
松口蘑熒光PE-Cy3標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-KCNAB3 Antibody人剛地弓形蟲(T.gondii)
貝葉多孔菌(親和純化) 兔IgMAnti-KCNAB1 Antibody人剛地弓形蟲(T.gondii)
赤芝熒光PE標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-KCNC2 Antibody人抗副流感病IgG抗體(anti-PIV IgG )
芽孢桿菌屬熒光Cy5標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-KCNC4 Antibody人抗副流感病IgG抗體(anti-PIV IgG )
交鏈孢屬熒光APC標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-KCNF1 Antibody人大皰性類天皰瘡抗體(BP)
膠孢鏈霉親和標(biāo)記兔抗人IgGAnti-KCNG2 Antibody人大皰性類天皰瘡抗體(BP)
勒仔樹根瘤菌PE標(biāo)記鏈霉親和Anti-KCNG3 Antibody人腸病(Enterovirus)
根癌土壤桿菌(可訂購(gòu))堿性磷標(biāo)記鏈霉親和Anti-KCNH1 Antibody人腸病(Enterovirus)
藤黃微球菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記鏈霉親和Anti-KCNH3 Antibody人包蟲抗體IgG
燕麥鐮孢金標(biāo)記鏈霉親和(10nm/15nm)Anti-KCNIP1 Antibody人包蟲抗體IgG
產(chǎn)黃纖維單胞菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記親合Anti-KCNH5 Antibody人百日咳(PT)
碳樣小單孢菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗HRPAnti-KCNH7 Antibody人百日咳(PT)
轉(zhuǎn)基因玉NK603質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗人IgAAnti-KCNIP1 Antibody人白色念珠菌(C.albicans)
蘇云金芽孢桿菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的蛋白AAnti-KCNIP3 Antibody人白色念珠菌(C.albicans)
釀酒酵母辣根過(guò)氧化物標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-KCNJ10 Antibody人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)
乳乳球菌乳亞種辣根過(guò)氧化物標(biāo)記人胰島蛋白Anti-KCNIP3 Antibody人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)
RAS蛋白樣激活劑1抗體多形魯氏酵母人卵巢上皮細(xì)胞
Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2抗體魯氏酵母人急性髓系白血病細(xì)胞
食道癌抑制生長(zhǎng)蛋白抗體羅斯酵母人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
環(huán)指蛋白139抗體洛格酵母正常人皮膚成纖維細(xì)胞
caspase8抑制劑(Z-IETD-FMK)釀酒酵母 水解乳蛋白骨橋
斡氏假單胞 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)骨特異性堿性磷
子午線假單胞 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基(高PH值)骨特異性堿性磷B
高雄山蟲草 HBI沙門氏生化鑒定條(GB)過(guò)氧化氫
枯草芽孢桿 HBI沙門氏生化鑒定條(SN)過(guò)氧化物還原2
ATCC 49479 HBI副溶血性弧生化鑒定條(GB)還原型
綠色木霉 HBI副溶血性弧生化鑒定條(SN)核因子κB
Ag10(蘑菇) HBIO157生化鑒定條(GB)環(huán)磷鳥
甘瓜發(fā)光桿 HBI志賀氏生化鑒定條(GB)環(huán)磷腺
土壤貪噬 HBI變形桿生化鑒定條(GB)環(huán)氧合2
糞腸球 HBI單增李斯特氏生化鑒定條(SN)緩激肽
葡萄座腔 HBI單增李斯特氏生化鑒定條(GB)氧化
大腸埃希氏 HBI蠟樣芽孢桿生化鑒定條(GB)黃體生成
擬莖點(diǎn)霉屬 3%堿性蛋白胨水顆?;钚匝醮?/span>
假單胞 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)顆粒肌鈣蛋白I
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