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貨號 | FS-X10662 |
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產(chǎn)品介紹:
EPZ031686是一個Ki分別是1.2nM和1.1nM的SMYD3和MEKK2的非競爭抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1808011-22-4 純度:99.60% 分子量:591.09 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:SMYD3和MEKK2抑制劑(EPZ031686)
英文名稱:EPZ031686
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10662
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
橄欖綠鏈霉菌Alexa Fluor 555標記的兔抗豬IgGAnti-XPC Antibody叢狀蛋白C1(PLXNC1)
青春雙歧桿菌Alexa Fluor 647標記的兔抗豬IgGAnti-XPO1 Antibody叢狀蛋白B3(PLXNB3)
海藻希瓦氏菌PE-Cy5.5標記的兔抗豬IgGAnti-XPO5 Antibody叢狀蛋白B2(PLXNB2)
圈卷產(chǎn)色鏈霉菌淡色變種堿性磷(AP)標記的兔抗豬IgGAnti-XRCC1 Antibody叢狀蛋白B1(PLXNB1)
豬屎豆根瘤菌FITC標記的兔抗豬IgGAnti-XRCC1 Antibody叢狀蛋白A4(PLXNA4)
雜色曲霉羅丹明標記的兔抗豬IgGAnti-XRCC1 Antibody叢狀蛋白A3(PLXNA3)
蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Alexa Fluor 488標記的兔抗豬IgGAnti-XRCC3 Antibody叢狀蛋白A2(PLXNA2)
美澳型核果褐腐病菌Alexa Fluor 350標記的兔抗豬IgGAnti-XRCC2 Antibody叢狀蛋白A1(PLXNA1)
豬丹絲菌Cy5.5標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-XRCC3 Antibody猬因子相互作用蛋白(HHIP)
雅致栓孔菌Cy7標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-XRCC4 Antibody(PB0954)猬?;D移(HHAT)
東方伊薩酵母羅丹明標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-Xrcc4 Antibody核糖基轉移1(HPRT1)
白淺灰鏈霉菌FITC標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-XRCC2 Antibody雌(E1)
納瓦河部落奇異球菌堿性磷(AP)標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-XRCC5 Antibody雌激受體相關受體α(ERRα)
綠色鏈霉菌膠體金標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-XRCC5 Antibody(PB0411)雌激受體β(ERβ)
小孔異擔子菌Cy3標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-XRCC5 Antibody雌激受體α(ERα)
洛格酵母Cy5標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-YBX1 Antibody垂體腫瘤轉化1相互作用蛋白(PTTG1IP)
磷化絲/蘇/酪抗體嗜鹽細菌屬小鼠脈絡膜組織提取物
核仁同源蛋白17抗體睪丸叢毛單胞菌小鼠角膜組織提取物
蛋白酪磷相互作用蛋白51抗體新鞘單胞菌小鼠腦靜脈血管組織提取物
前列腺相關P抗原家族成員1抗體蜃樓耶爾森氏菌小鼠嗅鞘組織提取物
SMYD3和MEKK2抑制劑(EPZ031686)豬鏈球 2-噻吩二磷腺
假單胞 1,3-二溴-2-煙酰腺二核磷
橡膠疫霉 (±)-2-氨基-1-丁煙酰腺二核
地衣芽孢桿 1,2,3-三溴烷NADH
克魯維尼爾巴克利酵母 4-間苯二結核病
非洲黑蛋巢 2-氨基-4-煙酰腺二核磷
南類芽孢桿 4-鄰苯二單純皰疹病抗原1
大腸埃希氏桿 7-氨基頭孢霉烷巴氏桿抗體
海洋伍斯 2--1,4-二坦唑
淡紫褐鏈霉 (R)-4-異基-2-惡唑烷酮過氧化氫
七角井鹽單胞 苯并噻唑Toll樣受體4
靈芝 苯并噻吩腫瘤壞死因子受體相關因子6
果生鏈核盤 茚腺病
德里腐霉 (R)-(+)-1,1,2-三苯基-1,2-乙二副流感病
曲霉 三[2-苯基吡啶-C2,N]銥(III)狂犬病抗原
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