RSK2抑制劑(FMK)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10920

中文名稱：RSK2抑制劑(FMK)

英文名稱：FMK

產品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

貨號：FS-X10920

產品介紹:

FMK是一種不可逆的RSK2抑制劑，能夠共價修飾RSK的C末端區(qū)域。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：821794-92-7

別名：RSK2 kinase inhibitor

純度：98.0%

分子量：342.37

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

嘴突凸臍蠕孢人內Anti-ZNF18 Antibody小鼠小扁豆結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體1(AFP-L1)

李克犁頭霉人過氧化物體增殖因子活化受體γAnti-ZNF227 Antibody小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)

美麗鹽單胞菌人環(huán)孢AAnti-ZNF232 Antibody小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)

大豆慢生根瘤菌人神經膠質纖維性蛋白Anti-ZNF23 Antibody小鼠骨退化特異標志物(CTX-2)

天藍色鏈霉菌人15脂加氧Anti-ZNF280A Antibody小鼠骨退化特異標志物(CTX-2)

曲霉人膽固酯轉移蛋白Anti-ZNF24 Antibody小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

康寧木霉人白三烯C4Anti-ZNF280C Antibody小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

人色CAnti-ZNF292 Antibody小鼠少突膠質髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)

秦氏蜜環(huán)菌人脂蛋白脂Anti-ZNF329 Antibody小鼠少突膠質髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)

豬布魯氏菌人糖原磷化同工IIAnti-ZNF287 Antibody小鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)

釀酒酵母人糖原磷化同工MMAnti-ZNF337 Antibody小鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)

釀酒酵母人糖原磷化同工BBAnti-ZNF384 Antibody小鼠垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)

Enterococcus faecium人脂蛋白αAnti-ZNF420 Antibody小鼠垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)

黃曲霉人骨膠原交聯(lián)Anti-ZNF397 Antibody小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)

白蠟多年臥孔菌人Ⅰ型前膠原C末端肽Anti-ZNF446 Antibody小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)

東方異擔子菌人脫氧吡啶/脫氧吡啶啉Anti-ZNF420 Antibody小鼠磷脂酰絲(PS)

氫離子轉運ATP合成A1抗體粉肉色杯傘黑腹果蠅胚胎細胞

基丁轉運蛋白VGAT抗體楊鏈格孢人表皮角質細胞

線粒體外膜孔蛋白3抗體電壓依賴陰離子通道蛋白3穎苞莖點霉人腎小球系膜細胞

魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體馬勃狀硬皮馬勃猴腎細胞
RSK2抑制劑(FMK)菊異莖點霉勞氏紫尿二磷葡萄糖轉移

草木棲劍總抗氧化能力

海唯鹽 4-松油超氧化物歧化

新城疫病 L-半乳糖

孢小克銀漢霉輪生變種 2′7′-二熒光二乙鹽氧化型

黃斑紅菇 6-羧基熒光二乙酯二

釀酒酵母卡莫汀蛋白質羰基

橙色微桿無氨基酵母氮源（YNB）乙酰酯

弗氏檸檬桿腺-5′-二磷鈉鹽溶

枯草芽孢桿聚乳羥基乙共聚物5羥色

微球聚乳羥基乙共聚物乙酰

威爾酵母硫鏈絲ATP

枯草芽孢桿 2-(溴甲基)苯甲色氧化

深海微小桿化銣抗肽

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