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ROCK1和ROCK2小分子抑制劑(RKI-1447)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-23 15:49:28瀏覽次數(shù):317次

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貨號(hào) FS-X10922
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中文名稱:ROCK1和ROCK2小分子抑制劑(RKI-1447)

英文名稱:RKI-1447

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào):FS-X10922

產(chǎn)品介紹:

RKI-1447是高效的ROCK1和ROCK2的小分子抑制劑,IC50值分別為14.5nM和6.2nM。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):1342278-01-6

純度:98.05%

分子量:326.37

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

枯草芽孢桿菌人抵抗Anti-ZNF875 Antibody小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

褐革菌人骨特異性堿性磷BAnti-ZNF76 Antibody小鼠少突膠質(zhì)髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)

韋斯特迪克氏曲霉人骨鈣/骨谷蛋白Anti-ZNFN1A2 Antibody小鼠少突膠質(zhì)髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)

腐爛粘束梗霉人可溶性核因子κB受體活化因子配基Anti-ZNF771 Antibody小鼠抗核抗體(ANA)

樟疫霉人1,25二羥基維生D3Anti-ZNF785 Antibody小鼠抗核抗體(ANA)

球孢白僵菌人組蛋白H2bAnti-ZP4 Antibody小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)

產(chǎn)短桿菌人骨保護(hù)Anti-ZRANB2 Antibody小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)

弓形蟲(chóng)(RH株)人骨成型蛋白受體ⅡAnti-ZNHIT1 Antibody小鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)

新城疫病人骨成型蛋白受體1AAnti-ZNRF2 Antibody小鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)

長(zhǎng)柄條孢牛肝人骨成型蛋白4Anti-ZRANB2 Antibody小鼠氧化型(GSGS)

黑曲霉人骨成型蛋白2Anti-ZSCAN26 Antibody小鼠氧化型(GSGS)

大腸埃希氏菌人環(huán)磷腺Anti-ZZZ3 Antibody小鼠還原型(GSH)

香菇人甘露聚糖結(jié)合凝集相關(guān)絲蛋白Anti-ZSCAN16 Antibody小鼠還原型(GSH)

木耳屬人周期依賴性激7Anti-ZSCAN22 Antibody小鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)

丁香假單胞菌人周期依賴性激2Anti-ZSCAN26 Antibody小鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)

構(gòu)巢曲霉人周期依賴性激1Anti-HRH2(Histamine receptor H2) Antibody小鼠c-fos  

VWCE抗體福毛鬼傘(斜面)兔眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞

Wnt1信號(hào)通路蛋白3抗體禾谷鐮孢菌(斜面)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來(lái)自NIH3T3)

WD重復(fù)膜蛋白61抗體雞縱菌人膽管癌細(xì)胞

EBV核蛋白2抗體巴西蘑菇正常大鼠腎細(xì)胞(EGF受體陽(yáng)性)
ROCK1和ROCK2小分子抑制劑(RKI-1447)球孢白僵 二十二肝腸孢蟲(chóng)

曲霉 加雷沙星白斑病

水原拉梅爾芽胞桿 氨基二茂鐵谷氨酰轉(zhuǎn)

發(fā)酵接合酵母 黃豆粉黃頭病

皺蓋疣柄牛肝 卡松甲殼動(dòng)物高血糖

細(xì)黃鏈霉 馬來(lái)苯那敏法尼甲基轉(zhuǎn)移

果生鏈核盤(pán) 3-羧基苯甲多巴脫羧

黃海芽孢桿 荷葉堿微囊藻-LR

海沙類諾卡氏* N-琥珀酰亞碳叔丁酯環(huán)磷鳥(niǎo)

尖孢鐮胞 3,4,5-氧基苯甲環(huán)磷腺

HIV假病 176-1 氧化

乳桿屬 2-萘-3 ,7-二磺二鈉精激

節(jié)桿 諾地爾中過(guò)敏原原肌球蛋白

靈芝 橡膠硫化促進(jìn)劑CBS(CZ)肌

海南假絲酵母 卡波姆934鳥(niǎo)

 


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