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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)
貨號(hào) | FS-X10251 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Z-VAD-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg Z-VAD-FMK是一種可滲透細(xì)胞的廣譜caspase抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):187389-52-2 別名:Z-VAD(OMe)-FMK;Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK 純度:98.0% 分子量:467.49 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Z-VAD-FMK
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
貨號(hào):FS-X10251
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
血紅擬革蓋菌肝生長(zhǎng)因子激活物抑制劑抗體Human SERPINI2 倉(cāng)鼠甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)免疫試劑盒
高溫金針菇HA tag標(biāo)簽單克抗體Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) 倉(cāng)鼠低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒
紡織品 纖維含量(棉與莫代爾纖維)血紅抗體Human SETD1B 倉(cāng)鼠基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫試劑盒
黃曲霉戊型肝炎病抗體Human SERPINB8 倉(cāng)鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)免疫試劑盒
釀酒酵母神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human SERPINB9 倉(cāng)鼠核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌神經(jīng)膠質(zhì)生長(zhǎng)因子/神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白β抗體Human SERPIND1(Serpin family D member 1) 倉(cāng)鼠過(guò)氧化物3(GPX3)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌組三聚體核結(jié)合蛋白1抗體Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) 倉(cāng)鼠促卵泡(FSH)免疫試劑盒
發(fā)酵乳桿菌(現(xiàn)貨)組蛋白去乙?;?/span>3抗體Human SERPINI2 倉(cāng)鼠二(MDA)免疫試劑盒
單核增生利斯特菌高度發(fā)散同源異型盒蛋白抗體Human SERINC1 倉(cāng)鼠白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
宇佐美曲霉腺病六鄰體蛋白抗體Human SERINC2 倉(cāng)鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒
龜裂鏈霉菌高密度脂蛋白結(jié)合蛋白抗體Human SERF2 倉(cāng)鼠白介3(IL-3)免疫試劑盒
多源中間根瘤菌轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體Human SENP1 倉(cāng)鼠白介2(IL-2)免疫試劑盒
釀酒酵母熱休克蛋白β7抗體Human GAL(Galanin peptides) 倉(cāng)鼠白介1β(IL-1β)免疫試劑盒
微球菌E3連接抑制受體2抗體Human SENP3 倉(cāng)鼠白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
芽孢桿菌透明質(zhì)及粘蛋白3抗體Human SENP5 倉(cāng)鼠γ干擾(IFNG)免疫試劑盒
臭曲霉22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框28抗體Human CFP(Properdin) 倉(cāng)鼠N端前腦鈉(NT-proBNP)免疫試劑盒
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:0.99異鼠李-3-O-新橙皮
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.6%亥茅
: 43948資源名稱: 分枝桿菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品5-羥色
caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)Sphingobacterium anhuiense 正基乙烯基M2型酮激
藤黃微球 4-氟-2-硝基溴芐連蛋白
雞白痢沙門(mén)氏 2,3-二氫苯并呋喃-5-甲二氧化
土曲霉 2,2,2-三乙基酯谷轉(zhuǎn)氨
香菇 丁氧羰基-D-二氨基二羥基巰基轉(zhuǎn)移
根霉屬 3-乙氧基乙酯過(guò)氧化物
魚(yú)肉 霉、甲砜霉、氟甲砜霉 4-吡唑乙脫氫家族1-A3
環(huán)狀芽孢桿 4-正庚基溴苯雌三
大腸埃希氏 4-溴-2-氟芐溴氨基乙二半合
綠色綠芽 內(nèi)向-3-氨基-9-甲基-9-氮雜雙環(huán)[3,3,1]壬烷上皮性鈣黏附蛋白
紅蠟盤(pán) 1-溴-2-氟乙烷樁蛋白
托拉斯假單胞 3-鄰苯二5-羥色受體4
堆形艾美耳球蟲(chóng) 2-酰孕酮受體
印度芽孢桿 3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡鹽鹽抗II型膠原自身抗體
尖孢隔指孢 乙炔二羧二乙酯血管緊張轉(zhuǎn)化
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