PTEFb/CDK9抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10780

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：PTEFb/CDK9抑制劑

英文名稱：BAY-1143572

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg

貨號(hào)：FS-X10780

產(chǎn)品介紹:

BAY1143572是高效選擇性的PTEFb/CDK9抑制劑；抑制AML細(xì)胞系的增殖的中間IC50為385nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1414943-88-6

純度：98.0%

分子量：387.43

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

假單胞菌大鼠肌激同工MB Anti-KPBB Antibody人艾柯病IgM(ECHO IgM)

緣彎孢小鼠L選擇Anti-KRT10 Antibody人艾柯病IgM(ECHO IgM)

蒙氏假單胞菌豚鼠卵清蛋白特異性IgGAnti-KRT17 Antibody人抗呼吸道合胞病抗體(RSV)

新疆糖絲菌大鼠活化A受體抗體Anti-KRT13 Antibody人抗呼吸道合胞病抗體(RSV)

膜醭畢赤酵母豚鼠白介4Anti-KRT16 Antibody人麻疹病IgM(MV IgM)

大腸埃希氏菌大鼠腦紅蛋白Anti-KRT15 Antibody人麻疹病IgM(MV IgM)

絳紅褐鏈霉菌人原鈣黏1Anti-KRT10 Antibody人柯薩奇病IgM(Cox V-IgM)

帕莫斯托木層孔菌鮭魚降鈣Anti-KRT2 Antibody人柯薩奇病IgM(Cox V-IgM)

Rhizobium 兔白介6Anti-KRT20 Antibody人柯薩奇病IgG(Cox V-IgG)

根霉屬小鼠粘蛋白/粘液5BAnti-KRT38 Antibody人柯薩奇病IgG(Cox V-IgG)

金黃殼囊孢兔白介10Anti-KRT4 Antibody人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)

三叉爪鬼筆大鼠血小板生成Anti-KRT37/38 Antibody人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)

鷹嘴豆中間根瘤菌小鼠垂體腺環(huán)化激活肽Anti-KSR2 Antibody人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)

空腸彎曲桿菌小鼠γ干擾Anti-KRT77 Antibody人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)

珊瑚諾卡氏菌(珊瑚色諾卡氏菌，珊瑚紅諾卡氏菌，小原放線菌)人皮膚T虜獲趨化因子Anti-KSHV ORF57 Antibody人乙型肝炎病前S2抗體(HBV preS2Ab)

枯草芽孢桿菌豚鼠免疫球蛋白GAnti-L1/ORF2 Antibody人乙型肝炎病前S2抗體(HBV preS2Ab)

癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab25抗體地霉屬小鼠腎集合管細(xì)胞

胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白RLLM1抗體果香地霉人直腸腺癌細(xì)胞

RNA結(jié)合基因蛋白3抗體白地霉人膀胱移行細(xì)胞癌

雄激受體相關(guān)蛋白24抗體皺褶假絲酵母人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞系
PTEFb/CDK9抑制劑蜂蜜水分檢測(cè)裝置孟加拉紅培養(yǎng)基顆粒皮質(zhì)酮;腎上腺酮

大腸埃希 7.5%肉湯顆粒葡糖氨基葡聚糖

釀酒酵母 Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)顆粒前列環(huán)

真灰綠正青霉四硫磺鹽煌綠增液基礎(chǔ)（TTB）顆粒前列腺E2

樺滴孔鹽胱增液（SC）顆粒前列腺F2a

芽孢桿結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）顆粒羥甲基戊二單酰還原

青霉?fàn)钫持忝?/span> 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒羥脯

枯草芽孢桿煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)顆粒去甲腎上腺

卡納霉鏈霉月桂基硫鹽胰蛋白胨肉湯（LST）顆粒固酮

枯草芽孢桿沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基顆粒缺血修飾白蛋白

葉近藤氏酵母沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基顆粒熱休克蛋白27

懷槐多年臥孔大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒熱休克蛋白70

美麗鏈霉胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒熱休克蛋白90

莖生擬莖點(diǎn)霉胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒相關(guān)血漿蛋白A

洋蔥伯克霍爾德 6-甲氧基-2-四氫萘酮溶
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)