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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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Rapamycin 自噬誘導(dǎo)劑，mTOR抑制劑

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間：2022-05-18 10:35:16瀏覽次數(shù)：194次

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貨號(hào) FS-X10254
Rapamycin 自噬誘導(dǎo)劑，mTOR抑制劑正在熱銷的產(chǎn)品：PFK2/PFKFB3 /FITC 熒光標(biāo)記6果糖激2抗體IgG鎢 99.99% metals basis
Phospho-PFK2 (Ser466) /FITC 熒光標(biāo)記化6果糖激2抗體IgG1,1,2-三烷 standard for GC, ≥99.8% (GC)
KLF2/FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠腸道內(nèi)富含的Kr

中文名稱：Rapamycin 自噬誘導(dǎo)劑，mTOR抑制劑

英文名稱：Rapamycin(Sirolimus)

產(chǎn)品規(guī)格：1mg

貨號(hào)：FS-X10254

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Rapamycin(Sirolimus)

產(chǎn)品規(guī)格：1mg

：53123-88-9

分子量：914.18

儲(chǔ)存：-20℃，有效期36個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

孤島鹽單胞菌二甲基化組蛋白H3K4抗體Human SCN4B 類人猿

海南小短桿菌二甲基化組蛋白H3K9抗體Human SDCCAG10 類人猿免疫球蛋白G4(IgG4)免疫試劑盒

梾木生殼針孢基化組蛋白H3抗體Human SEC23IP 類人猿巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒

植物乳桿菌植物亞種乙酰化組蛋白H3抗體Human VTCN1(V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1) 類人猿降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌乙?；M蛋白H3抗體Human SEC24C 類人猿降鈣(CT)免疫試劑盒

燼灰紅鏈霉菌果糖發(fā)酵亞種磷化肝核因子4α抗體Human SEC24A 類人猿黃體生成(LH)免疫試劑盒

賴芽胞桿菌屬高遷移率核小體結(jié)合蛋白1Human SEC31A 類人猿骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

根瘤菌磷化組蛋白H3抗體Human SDR39U1 蝌蚪

木蹄層孔菌組織相容性復(fù)合體α抗體Human SEC5/EXOC2 蝌蚪睪(T)免疫試劑盒

黑木耳肝生長因子激活抑制蛋白2抗體Human SEC61alpha 蝌蚪雌二(E2)免疫試劑盒

植物乳桿菌HOMER2抗體Human SDR42E1 蝌蚪γ基丁(GABA)免疫試劑盒

蟲類神食酵母瘤病調(diào)控因子1抗體（鋅指蛋白395）Human SDCCAG8 鯨

桔橙小單孢菌人類狀瘤病18 E6單克抗體Human SCN4B 鯨孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

白鵝膏菌（不可訂購）異質(zhì)核糖核蛋白F抗體Human SDCCAG10 鯨狀腺原(T3)免疫試劑盒

沃氏富鹽菌異質(zhì)核糖核蛋白K抗體Human SCNM1 鯨皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒

相思根瘤菌異質(zhì)核糖核蛋白L抗體Human SCNN1A 鯨甲狀腺(T4)免疫試劑盒

: N144資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格：1.0 M in toluene常春藤皂元

黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品D-松

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
Rapamycin 自噬誘導(dǎo)劑，mTOR抑制劑聚紅粉端孢霉 6-噠3-羧乙酯Flag標(biāo)簽

紅色蠟?zāi)?/span> 甲基膦二甲酯腺病抗體

香港洛克氏 三溴鼠痘病抗體

白僵 N-甲基二環(huán)己基肺炎病抗體

長蠕孢 磷氟達(dá)拉濱呼腸孤病III型抗體

 對(duì)溴苯甲酯脈絡(luò)叢腦膜炎病IgG抗體

Aquimonas 4-甲基吡唑流行性出血熱病抗體

Microbacterium marinilacus D-(+)-蘋果二乙酯過氧化物

變異鏈霉 5-氨基-1,2,4-噻二唑完整的成纖維生長因子23

干草鞘氨單胞 5--2-苯甲成纖維生長因子23的C端裂解片段

蠟狀芽孢桿 2-溴-5-苯甲去乙?；疭irtuin-6

枯草芽胞桿 雙(3-氨基-4-羥苯基)砜球蛋白G2b

產(chǎn)堿普羅威登斯 2-氨基-5-溴-3-芐氧基吡啶球蛋白G3

假單胞 7-氮雜-5-羧組織因子

鹽假單胞 2-(3-1H-吡唑基)吡啶抗抗體

 


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