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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)
貨號(hào) | FS-X10723 |
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英文名稱:Calyculin A
產(chǎn)品規(guī)格:0.5mM*20μL|0.5mM*50μL|0.5mM*200μL
貨號(hào):FS-X10723
產(chǎn)品介紹:
Calyculin A有效抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)的催化亞基,IC50值為0.5-1nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):101932-71-2 別名:(-)-Calyculin A 純度:98.0% 分子量:1009.17 儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
糞腸球菌N-鈣粘附分子抗原Anti-DBF4 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)
黑木耳E-鈣粘附分子抗原Anti-DAPK3 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)
枯草芽孢桿菌去氧腎上腺Anti-DCLK3 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)
玫瑰色鏈霉菌神經(jīng)粘蛋白抗原Anti-DBI Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)
枯斑擬盤多毛孢2型神經(jīng)纖維瘤抗原Anti-DCLK2 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)
孟氏假單胞菌活化T核因子1蛋白Anti-DCLRE1B Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)
膠紅酵母磷化核因子/磷化k基因結(jié)合核因子抗原Anti-DCLRE1C Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)
猜也蓬小單孢菌核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗原Anti-DCT Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)
木耳神經(jīng)元3抗原Anti-DDB1 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)
絲核菌屬鼻咽癌相關(guān)基因6(多肽)Anti-DDIAS Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)
虎皮香菇,漏斗香菇NIT2蛋白抗原Anti-DDB2 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)
煙曲霉神經(jīng)激肽A抗原Anti-DCTN2 Antibody人胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)
粉紅孢囊游動(dòng)放線菌NK受體2A/自然殺傷活化性受體2A抗原Anti-DDIAS Antibody人γ干擾(IFN-γ)
香菇*NK受體/自然殺傷活化性受體Anti-DDIT3 Antibody人γ干擾(IFN-γ)
北京鳥(niǎo)微菌腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗原Anti-DDX20 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
科氏梭菌腫瘤抑制基因抗原Anti-DDX24 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
P4501A2抗體紫紅曲霉小鼠白血病細(xì)胞
6磷果糖激2抗體紅曲霉人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞
蛋白激Cα抗體煙曲霉小鼠乳腺癌細(xì)胞
磷酯Cγ1抗體臭曲霉人肺腺癌細(xì)胞
PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)Sinomonas 4-三氟甲神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白
慢生根瘤 對(duì)三氟鈣衛(wèi)蛋白
黃青霉 4-氨基三氟甲苯S100鈣結(jié)合蛋白B
副球 4-三氟甲苯抗乙酰受體抗體
大腸埃希氏 1,9-二溴壬烷骨保護(hù)
香菇 1,8-二溴辛烷骨堿性磷
假單胞 3-三氟甲Dickkopf相關(guān)蛋白1
大毛霉 3-(三氟甲基)苯甲Dickkopf相關(guān)蛋白2
網(wǎng)孢麻孢 2--5-硝基吡啶骨鈣
橙蓋傘 2-溴-5-(三氟甲基)苯骨成型蛋白
中國(guó)油脂酵母 5-氟-2-層粘連蛋白
釀酒酵母 2--5-氟苯白介23
淡紫擬青霉 3-氟-4-白介27
葡萄座腔 4-氟-2-弓首蛔蟲(chóng)病抗體
卵孢白僵 3,4-二甲基氟苯包蟲(chóng)抗體
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