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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PI4KIIIβ抑制劑(PIK-93)
貨號(hào) | FS-X10926 |
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產(chǎn)品介紹:
PIK-93是一種合成的,有效的PI4KIIIβ抑制劑,IC50值為19nM,同時(shí)可抑制PI3Kγ和PI3Kα的活性,IC50值分別為16nM和39nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):593960-11-3 純度:99.13% 分子量:389.88 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:PI4KIIIβ抑制劑(PIK-93)
英文名稱:PIK-93
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10926
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
隱花青鵝膏人二氧化Bacillus cereus小鼠溶菌(LZM)
枯草芽孢桿菌人環(huán)加氧2Bacillus cereus小鼠可溶性CD30(sCD30)
蠟狀芽孢桿菌人周期依賴性激5Bacillus cereus小鼠可溶性CD30(sCD30)
楊樹細(xì)盾霉人激肽釋放Bacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)
腫痂鏈霉菌人磷酯Cγ鏈Bacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)
德爾布有孢酵母人神經(jīng)Bacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)
釀酒酵母人磷酯酰肌特異性磷酯CBacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)
谷棒桿菌Ⅳ型人磷酯CBacillus cereus小鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)
釀酒酵母人酪激2Bacillus cereus小鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)
白絨紅蛋巢菌人白介1β轉(zhuǎn)換Bacillus cereus小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
枯草芽孢桿菌人整合連接激1Bacillus cereus小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
乳桿菌屬人色P450c21B/21-羥化Bacillus cereus小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
草木樨中華根瘤菌人末端脫氧核轉(zhuǎn)移Bacillus cereus小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
黃曲霉人2,3-雙加氧Bacillus cereus小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)
人絲蛋白Bacillus cereus小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)
擬莖點(diǎn)霉人脾臟酪激Bacillus cereus小鼠活化A(ACV-A)
端??ü栿w蛋白抗體菠蘿泛生氏菌猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞
WBP2蛋白抗體#蘇云金芽孢桿菌急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞
Wolfram綜合征蛋白1抗體姬松茸Abm-1人急性髓性白血病細(xì)胞
信號(hào)通路Wnt16抗體小白菇(疊生)人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞
PI4KIIIβ抑制劑(PIK-93)膜醭畢赤酵母 鋁、砷、、鋇、鈹、鉍、鈣、鎘、鈷、鉻、銫、銅、鐵、汞、、鋰、鎂、錳、鈉、鎳、鉛、銣、硒、鋅、釩/低氧誘導(dǎo)因子-1α
硬皮地星 鋁、砷、、鋇、鈹、鉍、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉、鎳、鉛、銻、硒、鍶、鈦、、α干擾
蠟蚧 鋁、砷、鋇、鈹、鉍、鈣、鈰、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、鎵、汞、銦、、鋰、鎂、錳、鈉、鎳、鉛、釕、硒、鍶、S轉(zhuǎn)移
白色短波單胞 鋁、砷、、鋇、鉍、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、鎵、汞、銦、、鎂、錳、鉬、鈉、鎳、鉛、銻、鈧、硒、鍶、尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移
楊盤二孢(都不提供) 鋁、砷、、鋇、鈹、鉍、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、鎵、鍺、汞、、鋰、鎂、錳、鉬、鎳、磷、鉛、鉑、銣、磺基轉(zhuǎn)移
pBudCE4.1 甲酯紅霉-N-脫甲基
大腸埃希氏 砷、鉍、鎵、鍺、銦、鉛、銻、硒、錫,碲、/As, Bi, Ga, Ge, In, Pb, Sb,苯-4羥化
枯草芽孢桿 鋇、鈹、鈰、鈷、銦、鋰、鎂、鉛、銠、、釔/Ba, Be, Ce, Co, In, Li, Mg,氨基吡啉-N-脫甲基
蠟狀芽孢桿 鉍、鍺、銦、镥、銠、鈧、鋱、釔/Bi, Ge, In, Lu, Rh, Sc, Tb, Y白斑癥病雙抗體夾心
高盧蜜環(huán)(可訂購(gòu)) 鈧、銫、銦、銠/Sc, Cs, In, Rh磷脂酰
靈芝 鉍、鍺、銦、銠、鈧、鋱、釔/Bi, Ge, In, Rh, Sc, Tb, Y磷脂酰絲
海芋平臍蠕孢 砷、鈹、鎘、鉻、鎳、鉛、硒、/As, Be, Cd, Cr, Ni, Pb, Se, Tl游離脂肪
大毛霉 鋰、鈉、、、鎂、鈣、鍶、鋇/Li, Na, K, NH4+, Mg, Ca, Sr, BaGTP
熱帶靈芝 氟、、溴、硝根、硫根/F-, Cl-, Br-, NO3-, SO42-P糖蛋白;滲透性糖蛋白
腫囊腐霉 鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm,維生C
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