PI3K和mTOR抑制劑(GDC-0084)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10999

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PI3K和mTOR抑制劑(GDC-0084)

英文名稱：GDC-0084

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10999

產(chǎn)品介紹:

GDC-0084是一種能透過血腦屏障的PI3K和mTOR抑制劑，抑制PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kδ，PI3Kγ和mTOR，Ki值分別為2nM，46nM，3nM，10nM和70nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1382979-44-3

別名：RG7666

純度：99.54%

分子量：382.42

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

腫大地桿菌Escherichia coli大鼠孤腓肽(OFQ/N)

潘諾尼亞鎖霉Escherichia coli大鼠蛋白磷(PP)

索氏梭菌Escherichia coli大鼠蛋白磷(PP)

井水螺狀菌Escherichia coli大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)

葡萄座腔菌屬Escherichia coli大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)

節(jié)桿菌Escherichia coli大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)

間型彎孢Escherichia coli大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)

玫瑰小雙孢菌玫瑰亞種Escherichia coli大鼠膠原II(Collagenase II)

熱帶假絲酵母Escherichia coli大鼠膠原II(Collagenase II)

腸沙門氏菌腸亞種Escherichia coli大鼠髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)

美澳型核果褐腐病菌Escherichia coli大鼠髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)

嗜鹽芽孢桿菌屬Escherichia coli大鼠膠原I(Collagenase I)

哈茨木霉Escherichia coli大鼠膠原I(Collagenase I)

里氏木霉Escherichia coli大鼠磷化蛋白激C(P-PKC)

細疣籃狀菌Escherichia coli大鼠磷化蛋白激C(P-PKC)

硫氧化博斯氏菌Escherichia coli大鼠磷化外信號調(diào)節(jié)激(pERK)

核糖體p70S6蛋白激抗體大斑凸臍蠕孢SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細胞（亞系）

P因子/備解抗體青霉菌人正常肝細胞并芘轉(zhuǎn)化細胞系

過氧化活化增生受體γ抗體草青霉菌EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細胞

阿黑皮原抗體小月孢菌絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細胞
PI3K和mTOR抑制劑(GDC-0084)杰氏假單胞聚乙二2000單甲

擬枝孢鐮孢筋骨草L2

Marisediminicola 筋骨草G1

炭黑曲霉聚乙二1900單甲

根瘤筋骨草H1

莫哈韋芽孢桿聚乙二750單甲

金針12 筋骨草F4

細枝農(nóng)霉地芰普內(nèi)酯

呼倫貝爾無色需堿聚乙二550單甲

異常漢遜酵母山橘脂

釀酒酵母 3-表去氫土莫

嗜鹽芽孢桿中性氧化鋁

曲霉中性氧化鋁

大腸桿 6α-羥基豬苓C

漢塔成對桿堿性氧化鋁
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)