FGFR4抑制劑(FGF-401)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10808

產(chǎn)品介紹:

FGF-401是FGFR4的抑制劑，IC50值為1.9nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1708971-55-4

純度：98.0%

分子量：506.56

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：FGFR4抑制劑(FGF-401)

英文名稱：FGF-401

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10808

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

鼠傷門氏菌小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類Anti-NHLH1 Antibody人同型半胱(Hcy)

釀酒酵母小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白Anti-NKTR Antibody人同型半胱(Hcy)

矮棒曲霉人白介27Anti-NID1 Antibody人游離脂肪(FFA)

發(fā)酵畢赤酵母大鼠抗甲狀腺過氧化物抗體Anti-NKX2-1 Antibody人游離脂肪(FFA)

釀酒酵母人白介28Anti-NIFK Antibody人骨粘連蛋白(ON)

棘孢曲霉人白介29Anti-NKX2-6 Antibody人骨粘連蛋白(ON)

墨西哥畢赤酵母大鼠凋亡誘導(dǎo)因子Anti-NKX2-4 Antibody人葉(FA)

枯草芽孢桿菌人白介23Anti-NKX2-6 Antibody人葉(FA)

暗黑鏈霉菌小鼠CD30分子Anti-NKx2.2 Antibody 人內(nèi)(ET)

雙孢蘑菇小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類Anti-NKX3-1 Antibody人內(nèi)(ET)

光滑青霉人巨噬移動(dòng)抑制因子Anti-NKX2-8 Antibody人過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)

居巖牙殖球菌大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體Anti-NKX6-3 Antibody人過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)

環(huán)柄菇人組織因子途徑抑制物Anti-NLRX1 Antibody人環(huán)孢A(CsA)

擬青霉小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體Anti-NKX6-3 Antibody人環(huán)孢A(CsA)

彩色豆馬勃大鼠堿性磷Anti-NLE1 Antibody人神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)

釀酒酵母人干擾誘導(dǎo)蛋白10Anti-NMBR Antibody人神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)

軟骨肉瘤相關(guān)蛋白2抗體火木層孔菌人肝癌細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）

腎結(jié)合蛋白抗體淺黃褐栓菌人間皮瘤細(xì)胞

環(huán)指蛋白211抗體#放射形土壤桿菌人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Daoy（干細(xì)胞庫保藏）

RET指蛋白樣2/3抗體#需土節(jié)桿菌人小細(xì)胞肺癌
FGFR4抑制劑(FGF-401)大腸埃希 2-乙?；烈种频鞍?/span>

殼蕉孢馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基磷化B

雜色尾孢無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基纖溶抑制因子;凝血激活的纖溶抑制物

類動(dòng)膠杜搟氏屬卵黃雙抗培養(yǎng)基（EPV）白介10β

休哈塔假絲酵母休哈塔亞種茴香二甲基縮前列腺E合2

大豆慢生根瘤匹克氏肉湯基礎(chǔ)B6酮前列腺

解桿亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液（BGB）血栓

柑橘炭疽盤孢基代磺早孕因子蛋白

大腸埃希沙門氏成套生化鑒定管(SMGB)不飽和脂肪

喜鹽芽孢桿霍亂弧成套生化鑒定管飽和脂肪

樟疫霉沙門氏成套生化鑒定管(S)出血熱抗體

熱帶假絲酵母蠟樣芽孢桿成套生化鑒定管2,3-二磷甘油

Microbacterium pumilum 單增李斯特氏成套生化鑒定管紅膜蛋白

斯氏假單胞副溶血性弧成套生化鑒定管（SN/T0173-2010)Ⅰ型前膠原N端前肽

淡紫犁頭霉 O157成套生化鑒定管抗性磷

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