廣譜Aurora激酶抑制劑(AMG 900)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10674

產(chǎn)品介紹:

AMG900是一種有效的選擇性的廣譜Aurora激酶抑制劑，作用于Aurora A，B和C，IC50分別為5nM，4nM和1nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：945595-80-2

純度：99.30%

分子量：503.58

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：廣譜Aurora激酶抑制劑(AMG 900)

英文名稱：AMG 900

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10674

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

枯草芽孢桿菌蛋白激B（抗原）Anti-ALB Antibody半乳凝1(GAL1)

白磷蘑菇癌相關(guān)抗原Anti-AKT1S1 Antibody半胱酰白三烯受體2(CYSLTR2)

枯草芽孢桿菌間變型淋巴瘤激（抗原）Anti-ALCAM Antibody半胱酰白三烯受體1(CYSLTR1)

釀酒酵母5-羥色Anti-ALDH1L1 Antibody半胱甘豐富蛋白1(CSRP1)

Microbacterium flavum5-羥色受體1A(多肽)Anti-ALDH3A1 Antibody半胱豐富血管生成誘導(dǎo)因子61(CYR61)

哈茨木霉膜粘連蛋白A3抗體Anti-ALDOA Antibody半胱豐富跨膜BMP調(diào)節(jié)因子1(CRIM1)

產(chǎn)紫青霉金屬蛋白組織抑制因子-2(抗原)Anti-ALDOA Antibody半胱豐富分泌蛋白3(CRISP3)

腸膜明串珠菌金屬蛋白組織抑制因子(抗原)Anti-ALDOB Antibody半胱豐富蛋白1(CRIP1)

歧異假絲酵母胰島原Anti-ALDOC Antibody半胱蛋白抑制劑B(CSTB)

焦土鏈霉菌腎上腺髓質(zhì)受體（抗原）Anti-ALG6 Antibody半胱蛋白抑制劑A(CSTA)

秦氏蜜環(huán)菌纖溶原激活物抑制因子Anti-Alpha Internexin INA Intermediate Neurofilament Antibody半胱蛋白抑制劑9(CST9)

Sphingopyxis baekryungensis角蛋白7Anti-ALPK1 Antibody半胱蛋白抑制劑8(CST8)

赭曲霉異硫熒光(FITC)標(biāo)記糖尿病相關(guān)肽1-37Anti-ALPK2 Antibody半胱蛋白抑制劑7(CST7)

巴氏醋桿菌（現(xiàn)1）凋亡蛋白活性因子-1（抗原）Anti-ALPP Antibody半胱蛋白抑制劑6(CST6)

Acinetobacter chengduensis凋亡蛋白活性因子-1（抗原）Anti-ALPL Antibody半胱蛋白抑制劑5(CST5)

植物乳桿菌雄激受體（多肽抗原）Anti-ALX3 Antibody半胱蛋白抑制劑4(CST4)

磷二酯7抗體解脂假絲酵母大鼠胎兒真皮組織提取物

磷二酯7B抗體平滑假絲酵母大鼠視網(wǎng)膜組織提取物

先天性眼外肌纖維化相關(guān)蛋白FEOM2抗體埃切畢赤酵母大鼠晶狀體組織提取物

神經(jīng)母細(xì)胞瘤蛋白PHOX2B抗體白色假絲酵母(白色念珠菌)大鼠脈絡(luò)膜組織提取物
廣譜Aurora激酶抑制劑(AMG 900)曲霉 4-戊烯-1-趨化樣因子MARVEL跨膜結(jié)構(gòu)域包含5

海考克氏 1-辛炔-3-趨化樣因子MARVEL跨膜結(jié)構(gòu)域包含4

構(gòu)巢曲霉烯羥乙酯狂犬病

側(cè)耳 4-甲基-2-氧戊魏氏梭

指狀青霉 3,4,9,10－苝四甲酰二亞弓形蟲IgG抗體

短雙歧桿 (三氟甲基)基硅烷活性氧

金針菇 (三氟甲基)基硅烷組織蛋白B

Lysobacter daejeonensis 去氫膽組織蛋白D

拉雷斯戈麥斯氏隱球酵母普伐他汀鈣離子

大腸埃希氏 4,4'-二溴三苯白介13

瓦爾肯葉糖精轉(zhuǎn)化生長因子β

中瀨畢赤酵母 4-甲基-5-甲基-1,3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮口蹄疫抗凝抗體

杏鮑菇 3-[(基硅基)乙炔基]吡啶溶

秦氏蜜環(huán) 2-溴丁魏氏梭(D型)

皺褶青霉四甲基硫氫魏氏梭(C型)

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