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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 組蛋白脫乙酰酶(HDAC II)抑制劑(MC1568)
貨號(hào) | FS-X10884 |
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中文名稱:組蛋白脫乙酰酶(HDAC II)抑制劑(MC1568)
英文名稱:MC1568
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10884
產(chǎn)品介紹:
MC1568是組蛋白脫乙酰酶(HDAC II)的抑制劑,可用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):852475-26-4 純度:98.09% 分子量:314.31 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
香菇大鼠白介15Anti-SLC16A3 Antibody人低分子肝(LMWH)
假單胞菌人β乳糖蛋白抗體IgGAnti-SLC18A3 Antibody人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)
大毛霉大鼠白介16Anti-SLC22A18 Antibody人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)
網(wǎng)孢麻孢菌小鼠淋巴功能相關(guān)抗原3Anti-SLC22A6 Antibody人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)
橙蓋傘人抗肌內(nèi)膜抗體IgAAnti-SLC22A18 Antibody人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)
中國(guó)油脂酵母小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1Anti-SLC24A1 Antibody人補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)
釀酒酵母大鼠白介17Anti-SLC24A3 Antibody人補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)
淡紫擬青霉人抗糖蛋白抗體Anti-SLC24A4 Antibody人B因子(BF)
葡萄座腔菌大鼠白介1可溶性受體ⅠAnti-SLC24A4 Antibody人B因子(BF)
卵孢白僵菌小鼠骨成型蛋白7Anti-SLC25A21 Antibody人類白抗原G(HLA-G)
金黃亞種人抗單核抗體Anti-SLC25A11 Antibody人類白抗原G(HLA-G)
真姬菇人氧化低密度脂蛋白抗體Anti-SLC25A31 Antibody人補(bǔ)體片斷3b(C3b)
阿利坎特港富鹽菌大鼠可溶性E選擇Anti-SLC25A12 Antibody人補(bǔ)體片斷3b(C3b)
枯草芽胞桿菌小鼠透明質(zhì)Anti-SLC25A27 Antibody人補(bǔ)體片斷4b(C4b)
地衣芽胞桿菌(未復(fù)核可換ACCC06149)大鼠白介1可溶性受體ⅡAnti-SLC25A6 Antibody人補(bǔ)體片斷4b(C4b)
放射形根瘤菌小鼠胰高血糖樣肽1Anti-SLC27A4 Antibody人補(bǔ)體片斷5b(C5b)
四分子交聯(lián)體14抗體四旋蛋白#煙草節(jié)桿菌5-PeS1(2-D8)
酪蛋白硫轉(zhuǎn)移2抗體*槐耳A375sci
睪丸特異絲/蘇激6抗體堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌hTSC29
tRNA剪接內(nèi)切2抗體核果褐腐病菌hT279
組蛋白脫乙酰酶(HDAC II)抑制劑(MC1568)干酪棒桿 4--3-甲氧基苯乙酰
鞘氨盒屬 2-甲基四氫噻吩-3-酮肌轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白
巴氏金桿 乙糠硫酯過(guò)氧化氫
龜裂鏈霉龜裂亞種 1,1-二甲硫基硝基乙烯總膽固
大腸埃希氏 6-甲氧基-1-茚酮絲裂原激活的蛋白激;MAP激
大豆慢生根瘤 1,2,4-氧基苯肉瘤病
枯草芽孢桿 吩噁生長(zhǎng)抑抗體
暗黃類諾卡氏 并五苯補(bǔ)體蛋白2
不解糖假蒼白桿 3-氨基-6-溴吡啶羧肽B1
草青霉 4-二苯甲酮磷脂
尖孢鐮孢 4-甲基二苯甲酮性脂肪
白球擬酵母 鋁、砷、鋇、鎘、鈷、銅、鐵、汞、鋰、錳、鉬、鉛、鍶、鋅/Al, As, Ba, Cd, Co, Cu中性脂肪
紅球 磺甲基嘧啶彈性蛋白
泛枝芽孢桿 鉻、銅 /Cr, Cu/0µg/ml ;鈉/Na/20µg/ml雙鏈DNA抗體
枯草芽胞桿枯草亞種 鋰、鈉/Li, Na/2.0µg/ml ;、/K, NH4/200µg/ml脂肪氧合
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