實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
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參數規(guī)格：
產品名稱：豬源性成分（Porcine）核酸定性檢測試劑盒
產品規(guī)格：50T
產品貨號：FS-P10696
產品分類：PCR法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
尖鏈孢霉培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no莖提供形式: 凍結物安全等級: 1生長條件: 25C -80℃冰箱凍結；礦物油法

毛柄金錢菌(金針菇)培養(yǎng)基: 0014食用、藥用提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃

大島芽孢桿菌培養(yǎng)基: 821模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他

產朊假絲酵母培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no蜜蜂提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

鹽單胞菌培養(yǎng)基: 0223模式菌株: no泥樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

苜蓿中華根瘤菌與苜蓿共生固氮模式菌株: no美國苜蓿根瘤菌提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0053生長條件: 28-30℃

 -1415℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

球孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

青霉大洋絲狀真菌模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 10℃

43297=ATCC17896芳烴類固醇模式菌株: no種屬: Rhodococcus  erythropolis提供形式: 凍干粉安全等級: 1培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 10.0 g，牛肉提取物 3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水 1.0 L，pH 7.0生長條件: 30℃，好氧

小單孢菌屬抗細菌；抗金黃色葡萄球菌；抗枯草芽孢桿菌模式菌株: no樹根土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C

變異棒桿菌培養(yǎng)基: 472能夠降解石油，柴油等烷烴類物質，可用于生物修復。水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

綠粘帚霉生長條件: 25-28培養(yǎng)基: 14根際提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法

 -1416℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

黑曲霉培養(yǎng)基: CM0085檸檬。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法；其他

漢遜德巴利酵母培養(yǎng)基: 436模式菌株: no戈壁土提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

鹽吐根酚堿HCLS1  造血干特異性蛋白 兔抗人、大、小鼠磷化雌激素受體αIgG

鹽甜菜堿ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2)  蕈堿型乙酰膽堿受體（抗原） ESAIgG(標記)

一枝蒿甲素C-Peptide( C-PEP )  C-肽（C肽） E選擇素IgG

異虎耳草素CR (Calretinin)  鈣結合蛋白（抗原） 內皮素-1IgG

葉綠CRP (C-reactive protin)  C-反應蛋白（抗原） 內皮素-1IgG

羽扇烯酮ADORA3/A3AR(adenosine receptor A3)  腺苷受體A3抗原 內皮素-1IgG

標準品Integrin alpha V  巨噬來源的趨化因子αV多肽抗體

乙酰基二氫美味草phospho-AMPK alpha-1/PRKAA1(Thr198) peptide  磷化腺苷單磷活化蛋白激酶α1抗原 辣根過氧化物酶標記內皮素-1單克隆IgG

3-乙南美楝屬二CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1)  環(huán)腺苷應答元件結合蛋白（抗原） 生物素標記內皮素-1單克隆IgG

葉黃制菌素phospho-CREB-1   磷化環(huán)腺苷應答元件結合蛋白（多肽） 電子轉移黃素蛋白β肽IgG
豬源性成分（Porcine）核酸定性檢測試劑盒PazufloxacinMesilate　甲磺帕珠沙星　質量規(guī)格：>95%,BR

PazufloxacinMesilate　甲磺帕珠沙星（標準品）　質量規(guī)格：>95%,BR

Pefloxacinmesylatedihydrate　甲磺培氟沙星　質量規(guī)格：>95%,BR

Pefloxacinmesylatedihydrate　甲磺培氟沙星（標準品）　質量規(guī)格：>95%,BR

PemetrexedDisodium　培美曲塞二鈉　質量規(guī)格：>95%,BR

PemetrexedDisodium　培美曲塞二鈉（標準品）　質量規(guī)格：>95%,BR

Phthalylsulfathiazole　酞磺胺噻唑　質量規(guī)格：>95%,BR

Pioglitazonebase　匹格列　質量規(guī)格：>95%,BR

Pioglitazonebase　匹格列（標準品）　質量規(guī)格：>95%,BR

PioglitazoneHCl　匹格列鹽鹽　質量規(guī)格：>95%,BR

PioglitazoneHCl　匹格列鹽鹽（標準品）　質量規(guī)格：>95%,BR

PizotifenMalate　噻啶蘋果鹽　質量規(guī)格：>95%,BR

PolymyxinBSulfate　硫多粘菌素B　質量規(guī)格：>95%,BR

PolymyxinBSulfate　硫多粘菌素B(標準品)　質量規(guī)格：>95%,BR

PramlintideAcetate　醋普蘭林肽　質量規(guī)格：>95%,BR