FGFR4抑制劑(BLU9931)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10677

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：FGFR4抑制劑(BLU9931)

英文名稱：BLU9931

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10677

產(chǎn)品介紹:

BLU9931是一種有效的，選擇性的，不可能的FGFR4抑制劑，IC50值為3nM，對其選擇性分別是對FGFR1/2/3的297，184和50倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1538604-68-0

純度：98.05%

分子量：509.38

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

厚垣孢普可尼亞菌熒光FITC標(biāo)記瘦抗原Anti-APLF Antibody白介34(IL34)

淺藍(lán)灰曲霉Bcl-2（多肽抗原）Anti-APC10 Antibody白介33(IL33)

熱帶假絲酵母腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)（多肽片斷抗原）Anti-APLF Antibody白介32(IL32)

黑青霉擬南芥ACA11蛋白多肽抗原Anti-APOBEC4 Antibody白介31(IL31)

華根霉植物蛋白AHA3抗原（擬南芥）Anti-APOC3 Antibody白介3(IL3)

根瘤菌堿性成纖維生長因子（多肽抗原）Anti-APOE Antibody白介2受體β(IL2Rβ)

茄腐鐮刀菌血管緊張轉(zhuǎn)換2抗原Anti-APOA1 Antibody白介2受體α(IL2Rα)

八孢裂殖酵母腦鈉（多肽抗原）Anti-APOOL Antibody白介29(IL29)

葡枝根霉生物化腦鈉多肽Anti-APP Antibody白介28受體(IL28R)

針葉樹散斑殼過敏C5（補(bǔ)體C5）抗原Anti-APOC2 Antibody白介28B(IL28B)

肉桂褐鏈霉菌卵巢癌抗原Anti-APPBP2 Antibody白介28A(IL28A)

黃傘Caspase 激活的脫氧核糖核（抗原）Anti-AQP12A Antibody白介27(IL27)

盤長孢狀盤孢肌紅蛋白抗原Anti-ARAF Antibody白介26(IL26)

接棒桿菌鈣調(diào)節(jié)蛋白-1（抗原）Anti-ARFGAP3 Antibody白介25(IL25)

酵母軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗原Anti-ARFGEF2 Antibody白介23受體(IL23R)

假單孢菌天冬-胱特異性蛋白家族（抗原）Anti-ARFIP1 Antibody白介23(IL23)

蛋白質(zhì)精亞型2抗體糠秕馬拉色菌(糠秕孢子菌)人乳腺M(fèi)atchPair:乳腺上皮和腫瘤組織提取物

磷乙胺轉(zhuǎn)移2抗體博伊丁假絲酵母人前列腺M(fèi)atchPair: 前列腺上皮和腫瘤組織提取物

磷脂酰肌結(jié)合網(wǎng)格蛋白組裝蛋白抗體伯頓畢赤酵母人皮膚MatchPair:皮膚和腫瘤組織提取物

絲/蘇蛋白磷1調(diào)節(jié)亞基10抗體Pyxidicoccusfallax人腦MatchPair: 小腦和腫瘤組織提取物
FGFR4抑制劑(BLU9931)鰒發(fā)光桿噻吩-2-硫二酰甘油O-?；D(zhuǎn)移同源物1

嗜堿迪茨氏 2--5-硝基三氟甲苯Toll樣受體1

枯草芽胞桿 β-D-葡萄糖五乙酯Toll樣受體6

屎腸球 9,10-二氫菲Toll樣受體10

光硬皮馬勃 1-甲哌膠原蛋白

凍土毛霉皮生變型 2-氨基-5-溴嘧啶膠原蛋白α1（Ⅰ）型

根瘤 1-芐基-3-羥基吡咯烷膠原蛋白α2（Ⅰ）型

淡黃木層孔 1,3-二溴-5,5-二甲基海因布魯氏抗體

地衣芽孢桿 N-芐基化喹啶嗡[手性相轉(zhuǎn)移催化劑]結(jié)核桿抗體

釀酒酵母 2--4-硝苯相關(guān)糖蛋白

繩狀孢子懸浮液 2,3,4,5,6-五氟苯抗繆勒氏管

釀酒酵母 N-叔丁基二甲硅烷基-N-甲基三氟乙酰淀粉樣蛋白

曲霉 N-叔丁基二甲硅烷基-N-甲基三氟乙酰布魯氏桿病

嗜鹽涅斯特連科氏 5,7-二-8-羥基喹啉布魯氏桿病抗體

孔狀短小莖點(diǎn)霉均苯基磺酰循環(huán)復(fù)合物
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)