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EGFR tyrosin kinase抑制劑(OSI-420)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 15:37:13瀏覽次數:189次

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貨號 FS-X10887
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產品介紹:

OSI-420是erlotinib的活性代謝物,erlotinib為表皮生長因子受體酪an酸激酶(EGFR tyrosin kinase)抑制劑。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:183320-51-6

別名:Desmethyl Erlotinib;CP-473420

純度:98.90%

分子量:415.87

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

中文名稱:EGFR tyrosin kinase抑制劑(OSI-420)

英文名稱:OSI-420

產品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號:FS-X10887

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

釀酒酵母小鼠Ⅰ型膠原Anti-SLC9A6 Antibody人性T淋巴相關抗原4(CTLA-4/CD152)

硬結節(jié)桿菌人抗Anti-SLC9A7 Antibody輕鏈lambda(λ-IgLC)

香菇人抗核糖體P蛋白抗體Anti-SLC9A3R2 Antibody輕鏈lambda(λ-IgLC)

枯草芽孢桿菌小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽Anti-SLC9A8 Antibody人肽-主要組織相容性復合體復合物(pMHC)

薄花邊皮傘大鼠單核趨化蛋白1Anti-SLCO1B1 Antibody人肽-主要組織相容性復合體復合物(pMHC)

癭青霉小鼠可溶性P選擇Anti-SLCO1A2 Antibody人皮膚淋巴相關抗原(CLA)

蘋果鏈格孢人抗骨骼肌抗體Anti-SLIT3 Antibody人皮膚淋巴相關抗原(CLA)

硫氧化檸檬胞菌大鼠單核趨化蛋白2Anti-SLIT2 Antibody人凝血血栓調節(jié)蛋白復合物(T-TM)

紅色鹽幾何形菌大鼠單核趨化蛋白3Anti-SLC9A9 Antibody人凝血血栓調節(jié)蛋白復合物(T-TM)

布氏乳桿菌人甲狀腺抗體Anti-SMAD1 Antibody人溶血補體(Hc)

枇杷假尾孢小鼠S0蛋白Anti-SLU7 Antibody人溶血補體(Hc)

平菇小鼠白介1Anti-SLK Antibody人T受體(TCR)

枯草芽孢桿菌人胰島抗體Anti-SMAD1 Antibody人T受體(TCR)

模擬乳粉霉菌酵母菌質控樣品(定量)大鼠巨噬集落激因子Anti-SMAD2 Antibody人狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)

黃色粘球菌*大鼠巨噬來源的趨化因子Anti-SMARCA2 Antibody人狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)

枯草芽孢桿菌人抗唾液腺導管組織抗體Anti-SMARCC2 Antibody人可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)

環(huán)指蛋白98抗體血耳抗人谷光甘肽轉移單抗FMU-GST17

形成相關凋亡蛋白7抗體枝孢霉皰疹病毒單抗7

轉移生長因子β受體2抗體TGF-βRⅡ,TGFβRⅡ白黃小薄孔菌(斜面)ACV1

腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體教酒鏈霉菌H1H8
EGFR tyrosin kinase抑制劑(OSI-420)委內瑞拉鏈霉 聯(lián)氨/N2H4肉絳蟲IgE抗體

白僵 亞硝鹽氮/NO2-N衣原體抗體

解脂假絲酵母 五苯硫抗性

根瘤 亞硝根(亞硝鹽)/NO2-抗性磷5b

 溴離子(溴化物)/Br-I型膠原交聯(lián)羧基端肽

枯草芽孢桿 呋喃-2-游離甲狀腺

鴨疫里氏桿 總氮/N游離狀腺原

枯草芽孢桿 硝鹽氮/NO3-N三磷腺

枯草芽孢桿 4'-代苯乙酮幽門螺桿相關基因蛋白A

假單胞 銣/Rb磷糖異構

根瘤 磷根(磷鹽)/PO43-雌酮

根霉 4-氨基-1-丁神經酰

雞腸球 離子(化物)/I-腎

黃桿 Fmoc-L-瓜硫肝

炭疽芽孢桿 離子/NH4+鈣調磷

 


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