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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 突變體EGFR變構(gòu)抑制劑
貨號(hào) | FS-X10814 |
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產(chǎn)品介紹:
EAI045是突變體EGFR變構(gòu)抑制劑,在10μM ATP時(shí)抑制EGFR,EGFRL858R,EGFRT790M和EGFRL858R/T790M的IC50值分別為1.9,0.019,0.19和0.002μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1942114-09-1 純度:99.33% 分子量:383.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:突變體EGFR變構(gòu)抑制劑
英文名稱:EAI045
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號(hào):FS-X10814
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
薄層菌人腫瘤壞死因子βAnti-OR10AD1 Antibody人骨成型蛋白2(BMP-2)
維氏紅色球菌小鼠乙型肝炎表面抗原Anti-OR10A6 Antibody人骨成型蛋白2(BMP-2)
溜曲霉大鼠白介2受體Anti-OR10A7 Antibody人環(huán)磷腺(cAMP)
猴頭人可溶性EndoglinAnti-OR10AG1 Antibody人環(huán)磷腺(cAMP)
卷枝毛霉詹森變型人腫瘤壞死因子αAnti-OR10AD1 Antibody人甘露聚糖結(jié)合凝集相關(guān)絲蛋白(MASP)
毛木耳大鼠腎上腺髓質(zhì)Anti-OR10AG1 Antibody人甘露聚糖結(jié)合凝集相關(guān)絲蛋白(MASP)
枯草芽胞桿菌人腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡAnti-OR10C1 Antibody人周期依賴性激7(CDK-7)
大腸埃希氏菌定量標(biāo)準(zhǔn)菌株大鼠β內(nèi)啡肽受體Anti-OR10D4P Antibody人周期依賴性激7(CDK-7)
枯草芽孢桿菌小鼠活化蛋白CAnti-OR10C1 Antibody人周期依賴性激2(CDK-2)
異常漢遜酵母小鼠α葡萄糖Anti-OR10G2 Antibody人周期依賴性激2(CDK-2)
綿羊肺炎支原體人腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠAnti-OR10D4P Antibody人周期依賴性激1(CDK-1)
印度洋細(xì)小棒狀菌大鼠鈣/鈣調(diào)依賴性蛋白激2Anti-OR10G6 Antibody人周期依賴性激1(CDK-1)
芽孢桿菌小鼠Anti-OR10G4 Antibody人磷化腺活化蛋白激(AMPK)
綠粘帚霉人轉(zhuǎn)化生長因子β1Anti-OR10G2 Antibody人磷化腺活化蛋白激(AMPK)
黏膜乳桿菌大鼠肝脂Anti-OR10G7 Antibody人乳脫氫(LDH)
枯草芽孢桿菌人轉(zhuǎn)化生長因子αAnti-OR10H1 Antibody人乳脫氫(LDH)
G蛋白結(jié)合蛋白R(shí)AB6A抗體蛹草1號(hào)人骨肉瘤細(xì)胞
復(fù)制激活因子C2抗體#褐色諾卡氏菌人甲狀腺癌細(xì)胞
酯抑制劑8抗體肝色牛排菌人食管鱗癌細(xì)胞
神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白1抗體大杯香菇人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞
突變體EGFR變構(gòu)抑制劑新城疫病 TTC胰島
徐家莊鏈霉 波爾頓選擇性增肉湯添加劑優(yōu)黑
斯氏土地桿 改良CCD瓊脂添加劑增殖核抗原
分散泛 脫纖維羊血正常T表達(dá)和分泌因子
瓦克青霉 改良Skirrow瓊脂添加劑脂氧A4
腐皮殼 FBP溶液中性粒防御1-3
Brenneria rubrifaciens 青霉制備培養(yǎng)基腫瘤壞死因子α
釀酒酵母 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基主要堿性蛋白
毛頭鬼傘 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基主要組織相容性復(fù)合體
棘孢新內(nèi)果 胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)轉(zhuǎn)化生長因子β1
法氏檸檬桿 胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)組
產(chǎn)芽胞梭(生胞梭)(可訂購) 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基補(bǔ)體片段3a
短芽孢桿 嗜鹽性試驗(yàn)用胰胨水南非2型口蹄疫病抗體
灰平鏈霉 副溶血性弧成套生化鑒定管(HRGB)基質(zhì)金屬蛋白13
褐單梗曲霉 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基雌二
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