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貨號 | FS-X10638 |
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產(chǎn)品介紹:
AT9283是一種多靶點抑制劑,抑制JAK2和JAK3的活性,IC50值分別為1.2nM和1.1nM;對Aurora A,Aurora B和Abl(T315I)也有作用。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:896466-04-9 純度:99.13% 分子量:381.43 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:JAK2和JAK3抑制劑(AT9283)
英文名稱:AT9283
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10638
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
Microbacterium marinilacus膠體金標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGFBR2 Antibody輔肌動蛋白α3(ACTN3)
交鏈孢辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGFBR2 Antibody輔肌動蛋白α2(ACTN2)
白腐墊殼孢Cy5.5標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGM2 Antibody輔肌動蛋白α1(ACTN1)
淤泥假單胞菌Cy7標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGM2 Antibody(PB0469)弗林蛋白(FUR)
異常漢遜酵母PE標(biāo)記的兔抗親和Anti-TH Antibody(PB0470)封閉蛋白9(CLDN9)
貝倫格葡萄座腔菌梨生?;?/span>Cy3標(biāo)記的兔抗親和Anti-THBS1 Antibody封閉蛋白8(CLDN8)
棉子糖腸球菌Cy5標(biāo)記的兔抗親和Anti-THBS1 Antibody封閉蛋白7(CLDN7)
黃曲霉生物標(biāo)記的兔抗親和Anti-THBS2 Antibody封閉蛋白6(CLDN6)
胡椒枯萎病PE-CY5標(biāo)記的兔抗親和Anti-THBS1 Antibody封閉蛋白5(CLDN5)
短波單胞菌屬APC標(biāo)記的兔抗親和Anti-THBS2 Antibody封閉蛋白3(CLDN3)
傘枝犁頭霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗親和Anti-THPO Antibody封閉蛋白25(CLDN25)
黃褐紋白蟻傘Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗親和Anti-THPO Antibody封閉蛋白24(CLDN24)
乳明串珠菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗親和Anti-THPO Antibody封閉蛋白23(CLDN23)
串珠鐮孢*Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗親和Anti-THPO Antibody封閉蛋白22(CLDN22)
白僵菌PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗親和Anti-Thrombospondin/THBS1 Antibody封閉蛋白20(CLDN20)
新疆斯克爾曼氏菌PE-Cy7標(biāo)記的兔抗親和Anti-THY1 Antibody封閉蛋白2(CLDN2)
含patatin樣磷脂1抗體蚯蚓芽胞桿菌人胚胎絨毛膜組織提取物
酪酪肽抗體蕈狀芽胞桿菌人胚胎滋養(yǎng)層組織提取物
羧化抗體耐久腸球菌(堅韌鏈球菌)人腎小管組織提取物
脫氫復(fù)合物X蛋白抗體盲腸腸球菌人輸尿管組織提取物
JAK2和JAK3抑制劑(AT9283)松杉靈芝 3-十二烷基噻吩5羥基乙
葡萄座腔 十四烷基基硫氫5羥色
釀酒酵母 硫銠溶液低氧誘導(dǎo)因子-2α
爪哇鏈霉 過鈉四水合物葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2
矩圓黑盤孢 2-溴化茚游離脂肪
sto128(大球蓋菇) 2-氨基-3-吡啶β羥丁
灰藍(lán)毛霉 二氫乙錠熱休克蛋白27
污水溶桿 異辛乳脫氫
深紅酵母 BOC-D-谷5-叔丁酯血管性血友病因子
煙曲霉 喹吖啶酮剛果出血熱IgG抗體
黑曲霉 桃肺炎支原體抗體
腸沙門氏腸亞種嬰兒血清型 偶氮二羰基二嗎啉絲狀支原體抗體
黑曲霉 甲肉桂酯降鈣
根瘤屬 (R)-(-)-1-甲基-3-羥基吡咯烷甲狀旁腺
克魯斯假絲酵母 (S)-(+)-1-甲基-3-羥基吡咯烷維生D
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