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DAPK抑制劑(TC-DAPK 6)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-23 14:46:10瀏覽次數(shù):205次

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貨號(hào) FS-X10819
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FDA(Human Fructose-1,6-bisphosphate aldolase) ELISA Kit 人果糖1,6二縮BOC-N--D-氨 98%
cath-D(Human cathepsin D) ELISA

中文名稱:DAPK抑制劑(TC-DAPK 6)

英文名稱:TC-DAPK 6

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號(hào):FS-X10819

產(chǎn)品介紹:

TC-DAPK6是一種有效的ATP競(jìng)爭(zhēng)性的選擇性DAPK抑制劑,作用于DAPK1和DAPK3,IC50分別為69和225nM。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):315694-89-4

別名:DAPK inhibitor

純度:95.0%

分子量:276.29

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

枯草芽孢桿菌大鼠網(wǎng)膜Anti-OR2F2 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)

意外鏈霉菌人單核趨化蛋白1Anti-OR2G2 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)

羅伊氏乳桿菌小鼠轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)Anti-OR2D2 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)

釀酒酵母人L選擇Anti-OR2G3 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)

毛霉屬小鼠骨形成蛋白Anti-OR2H2 Antibody人促分裂原活化蛋白激激活的蛋白激3(MAPKAPK3)

大腸埃希菌大鼠孤腓肽Anti-OR2I1P Antibody人促分裂原活化蛋白激激活的蛋白激3(MAPKAPK3)

球孢白僵菌小鼠視黃結(jié)合蛋白4Anti-OR2J3 Antibody人血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)

樟疫霉人白介9Anti-OR2J2 Antibody人血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)

E.coli EPI400大鼠蛋白磷Anti-OR2K2 Antibody人抑肽(AP)

產(chǎn)腸大腸埃希氏菌大鼠硫氧還蛋白還原Anti-OR2L5 Antibody人抑肽(AP)

白淺灰鏈霉菌人白介8Anti-OR2M3 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)

中國(guó)漢納酵母小鼠6前列腺F1aAnti-OR2M7 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)

樟疫霉人白介6Anti-OR2M2 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)

黃桿菌大鼠硫氧化還原蛋白Anti-OR2T1 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)

枯草芽孢桿菌小鼠戊糖Anti-OR2T10 Antibody人蛋白激A(PKA)

廣布擬盤多毛孢大鼠膠原IIAnti-OR2T2 Antibody人蛋白激A(PKA)

環(huán)指蛋白32抗體#雙輪絲鏈霉菌小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細(xì)胞

RNA結(jié)合蛋白26抗體#草菇乳乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒

Nogo66受體相關(guān)蛋白3抗體#天藍(lán)色鏈霉菌McCoy s 5A基礎(chǔ)培養(yǎng)基:

RNA尿合結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體花生生莖點(diǎn)霉兔紅細(xì)胞6%
DAPK抑制劑(TC-DAPK 6)矩圓黑盤孢 豌豆浸粉超氧化物歧化

雅致放射毛霉 頭孢紙片(30ug/片)

塔賓曲霉 萘啶酮紙片(30ug/片)乙酰酯

Sphingobacteriaceae CC瓊脂添加劑酪

解酯假絲酵母解酯變種 纖維二糖-多粘E(CC)瓊脂胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3

布魯氏 生物Ⅱ型 大腸桿/大腸群液體顯色培養(yǎng)基球蛋白A

枯草芽胞桿枯草亞種 MMO-MUG培養(yǎng)基粘蛋白5AC

糙孢曲霉 MUGal肉湯晝夜自發(fā)輸出周期蛋白kaput

畢赤酵母 霉、酵母快檢紙片食欲肽

膠孢 山梨麥康凱瓊脂基礎(chǔ)(SMAC)CD4分子

鏈霉 改良麥康凱肉湯(CT-MAC)粘蛋白;粘液5B

變異鏈球 Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基可溶性球蛋白A

嗜中溫寒冷桿 茜-β-半乳糖肉湯(Aliz-gal肉湯)白三烯C4

木拉克酵母屬 半胱稀釋液半胱氨酰白三烯受體2

馬里努斯咸海鮮球 溴甲紫蛋白胨培養(yǎng)液半胱白三烯受體1

 


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