WNT抑制劑(Pyrvinium pamoate)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10890

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：WNT抑制劑(Pyrvinium pamoate)

英文名稱：Pyrvinium pamoate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10890

產(chǎn)品介紹:

Pyrvinium pamoate是一種有效驅(qū)蟲劑，也是WNT有效抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：3546-41-6

別名：Pyrvinium embonate

純度：98.0%

分子量：575.7

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

南假單胞菌人髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgGAnti-SRPK1 Antibody人過敏/補體片斷4(C4a)

新疆鹽地桿菌人抗蛋白3抗體IgGAnti-SPTBN5 Antibody人補體片斷5a(C5a)

凝結(jié)芽胞桿菌大鼠B因子Anti-SPTBN1 Antibody人補體片斷5a(C5a)

印度洋斯塔普氏菌大鼠抑瘤MAnti-SRCIN1 Antibody人補體片斷3a(C3a)

大腸桿菌人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgAAnti-SRSF11 Antibody人補體片斷3a(C3a)

毛柄金錢菌(金針菇)人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體Anti-SRSF11 Antibody人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)

嗜糞細薄菌大鼠胎盤生長因子Anti-SRSF3 Antibody人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)

蘇云金芽孢桿菌九州亞種人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體Anti-SRSF4 Antibody人Ⅸ(FⅨ)

擴展鐮孢大鼠正常T表達和分泌因子Anti-SS18 Antibody人Ⅸ(FⅨ)

根瘤菌人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體Anti-SRSF5 Antibody人Ⅹ(FⅩ)

苦白蹄大鼠L解Anti-SRY Antibody人Ⅹ(FⅩ)

福氏志賀氏菌人抗核小體抗體IgGAnti-SRSF4 Antibody人血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(VWF)

黃曲霉大鼠可溶性CD30配體Anti-SRSF7 Antibody人血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(VWF)

運動節(jié)桿菌人抗硬皮病抗體70Anti-SRSF7 Antibody人纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)

賴芽孢桿菌大鼠可溶性CD40配體Anti-SS18 Antibody人纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)

潮汐科維爾氏菌人抗SS-B/La抗體Anti-SSBP1 Antibody人凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)

轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體奧氏蜜環(huán)菌2E8A5

星形細胞瘤高表達蛋白抗體環(huán)指蛋白0紅緣擬層孔菌4B14A1

線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)位抗體尖鐮孢黃瓜?；?/span>Jurkat-LTRGT

前列腺癌和結(jié)腸癌相關(guān)蛋白猴頭菇whiov-P24C-MoAb
WNT抑制劑(Pyrvinium pamoate)硫磺硫根(硫鹽)/SO42-還原型輔Ⅰ；煙酰腺二核

釀酒酵母硝根(硝鹽)/NO3-氧化型輔Ⅰ

芬芳鐮刀四[N-鄰苯二甲酰-(S)-苯]二銠乙乙酯加合物酮氧化

蠟狀芽孢桿氟離子(氟化物)/F-鼠相關(guān)蛋白

假單胞屬 5-硝基-2-甲神經(jīng)肽Y

大腸桿離子(化物)/Cl-促黑皮質(zhì)原

尖孢鐮孢鋯/Zr瘟病E0蛋白抗體

植物乳桿蒽醌-2-磺鈉鹽一氧化氮合運輸因子

土曲霉鋅/Zn二肽

粘質(zhì)沙雷氏鎢/W淀粉

蠟狀芽孢桿帕莫羧肽A

釀酒酵母 2,2-雙[4-(4-氨基苯氧基)苯基]烷白三烯B4

美澳型核果褐腐病釩/V分泌型磷脂A2

Fibrella 4,4'-雙(4-氨苯氧基)聯(lián)大腸桿K99抗體

鯉鏈霉 /Tl心肌肌鈣蛋白T
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)