當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> Wnt抑制劑(IWR-1)
貨號 | FS-X10490 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:IWR-1 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg IWR-1是一種Wnt抑制劑,在L Wnt-3A細(xì)胞中,IC50值為180nM,通過穩(wěn)定Axin破壞復(fù)合體來提高β-連環(huán)素的磷酸化。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1127442-82-3 別名:endo-IWR 1;IWR-1-endo 純度:99.83% 分子量:409.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:Wnt抑制劑(IWR-1)
英文名稱:IWR-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10490
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
根瘤菌離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白SLC7A9抗體Anti-FN1 Antibody性別決定區(qū)Y框蛋白18(SOX18)
谷棒桿菌溶質(zhì)載體蛋白家族20成員2抗體Anti-FOSB Antibody性別決定區(qū)Y框蛋白1(SOX1)
硬水黃桿菌S100鈣結(jié)合蛋白A6抗體Anti-FNDC5 Antibody興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5(EAAT5)
鐮刀菌屬堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子SCXA抗體Anti-FOS Antibody興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(EAAT4)
清道夫受體STAB2抗體Anti-FOSB Antibody興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(EAAT3)
嗜一氧化碳假諾卡氏菌維甲誘導(dǎo)蛋白6抗體Anti-FOSB Antibody興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(EAAT2)
香菇骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體Anti-FOSL2 Antibody興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(EAAT1)
魯氏淀粉霉α橫紋肌輔肌動蛋白/α-SCA抗體Anti-FOSL1 Antibody形成結(jié)合蛋白1(FNBP1)
費(fèi)比恩畢赤酵母新型分泌表面蛋白/成骨相關(guān)蛋白SCUBE3抗體Anti-FOXA1 Antibody形成2(FMN2)
1ml吸頭內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE2抗體Anti-FOXA3 Antibody形成1(FMN1)
光神農(nóng)球菌亞硫鹽氧化抗體Anti-FOXC1 Antibody星形肌動蛋白2(ASTN2)
芽枝狀枝孢生長抑抗體Anti-FOXF1 Antibody星形肌動蛋白1(ASTN1)
(蠟狀芽胞桿菌)磷化突觸融合蛋白1抗體Anti-FOXE1 Antibody信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接分子1(STAM1)
佛羅里達(dá)無孢子側(cè)耳固酰脫氫1抗體Anti-FOXI1 Antibody信號7A(SEMA7A)
枯草芽孢桿菌解旋SNF2L抗體Anti-FOXK1 Antibody信號6D(SEMA6D)
大腸埃希氏菌山梨脫氫抗體Anti-FOXL1 Antibody信號6C(SEMA6C)
Smad蛋白相互作用蛋白1抗體棒狀乳桿菌棒狀亞種H22小鼠肝癌細(xì)胞
Schlafen家族14抗體唾液乳桿菌水楊亞種NCTC 1469小鼠正常肝細(xì)胞
SEMCAP3蛋白抗體綠色乳桿菌U14小鼠子宮頸癌細(xì)胞
小泛相關(guān)修飾蛋白1抗體詹氏桿菌IEC-6大鼠小腸上皮細(xì)胞系
Wnt抑制劑(IWR-1)黑曲霉 噻吩并[3,2-b]噻吩色羥化1
金黃殼囊孢 (R)-(-)-3-甲乙酯原癌基因c-Met蛋白
日本曲霉 (R)-(-)-3-甲早期生長反應(yīng)因子4
肺炎克雷伯氏 2-雙環(huán)己基膦-2 '-甲基聯(lián)苯ED-1;sCD68分子
枝孢霉 2,5-二溴噻吩[3,2-b]噻吩次-鳥磷核糖轉(zhuǎn)移
栗色牛肝 1-溴-4-環(huán)己基苯鳥脫氨
豬丹絲 3,5-二甲基異惡唑-4-羧羧化基質(zhì)谷蛋白
香蕉 3-乙炔基吡啶HMG-CoA還原
褐球固氮 N-Boc-N'-succinyl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediam過氧化物還原1
法氏沃氏黃桿 聚己內(nèi)酰粉Janus激1
土曲霉 聚己內(nèi)酰粉Janus激3
毛木耳 聚己內(nèi)酰粉次-鳥磷核糖轉(zhuǎn)移
多變毛霉 聚己內(nèi)酰粉磷脂酰肌糖生物合成類F蛋白
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 1,3-二(2,6-二異基苯基)化咪唑過氧化物還原6
蠟狀芽孢桿 N-(叔丁氧羰基)-1-(2,4-二基)-L-組過氧化物還原6
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