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貨號 | FS-X10639 |
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產(chǎn)品介紹:
Masitinib是一種有效的Kit和PDGFRα/β抑制劑,IC50值為200nM和540nM/800nM,對ABL和c-Fms也有微弱抑制作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:790299-79-5 別名:AB1010 純度:99.92% 分子量:498.64 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:Kit和PDGFRα/β抑制劑(Masitinib)
英文名稱:Masitinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10639
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
奧斯陸莫拉氏菌Cy3標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-THY1 Antibody封閉蛋白19(CLDN19)
紅緣層孔菌Cy5標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-THY1 Antibody封閉蛋白17(CLDN17)
不等彎孢Cy5.5標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-THY1 Antibody封閉蛋白16(CLDN16)
根霉Cy7標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIA1 Antibody封閉蛋白15(CLDN15)
膠韌革菌PE標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIAM1 Antibody封閉蛋白14(CLDN14)
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TICAM1 Antibody封閉蛋白12(CLDN12)
根霉PE-CY5標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TICAM1 Antibody封閉蛋白11(CLDN11)
枯草芽孢桿菌APC標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIE1 Antibody封閉蛋白10(CLDN10)
球形節(jié)桿菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TICAM1 Antibody封閉蛋白1(CLDN1)
側(cè)孢短芽孢桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMM17A Antibody糞卟啉原氧化(CPOX)
金色鏈霉菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMP1 Antibody分泌型磷蛋白2(SPP2)
芽孢桿菌屬Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMM8A/DDP Antibody分泌球蛋白家族2A成員2(SCGB2A2)
大杯蕈PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMP1 Antibody分泌粒蛋白Ⅴ(SCG5)
產(chǎn)堿假單胞菌PE-Cy7標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMP2 Antibody分泌粒蛋白Ⅲ(SCG3)
盤長孢狀盤孢生物標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMP1 Antibody分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)
構(gòu)巢曲霉堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗生物抗體IgGAnti-TIMP2 Antibody分泌跨膜蛋白1(SECTM1)
果糖-2,6-二磷心肌抗體Hyphomonasjohnsonii人尿道組織提取物
磷羧化2抗體干酪棒桿菌(乳酪棒桿菌)人前列腺組織提取物
果糖-2,6-二磷1抗體Methylophagamurata人腎系膜組織提取物
磷葡萄糖內(nèi)酯抗體Sphingomonasfennica人腎動脈組織提取物
Kit和PDGFRα/β抑制劑(Masitinib)枯草芽胞桿枯草亞種 5-溴-2-羥基煙白介1
櫟小皮傘 咖啡苯乙酯白介12
大腸埃希氏桿 位辛內(nèi)酯皮質(zhì)酮;腎上腺酮
枯草芽孢桿 硫亞鈰(III)八水合物白蛋白
鍋孢霉 3-(1-萘氨基)磺鈉尿氮
栗酒裂殖酵母 1-羥基四苯基環(huán)戊二烯基(四苯基-2,4-環(huán)戊二烯基-1-酮)-μ-羥基四羰基二釕(II)促腎上腺皮質(zhì)
耐輻射奇球 化四丁基肌激
白僵 富馬鹽血管緊張Ⅱ
釀酒酵母 2-(1-金剛烷基)-4-溴苯甲固酮
臭曲霉 5--4-氟-2-總蛋白
冠突曲霉 4-溴-2,6-二氟苯甲血糖
冷桿 4-溴-2,6-二氟乳脫氫
聚生殼 N-芴甲氧羰基-D-谷 gamma-叔丁酯成纖維生長因子5
海洋桿 2-羥基-4-三氟甲基嘧啶小反芻獸疫病抗體
膜醭畢赤酵母 4-乙總抗氧化能力
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