Src/Abl抑制劑(Bosutinib)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10643

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Src/Abl抑制劑(Bosutinib)

英文名稱：Bosutinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10643

產(chǎn)品介紹:

Bosutinib是一種新型Src/Abl雙重抑制劑，在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中IC50分別為1.2 nM 和1nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：380843-75-4

別名：SKI-606

純度：99.83%

分子量：530.45

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

耐冷冷桿菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgGAnti-TNFRSF10A Antibody防御β127(DEFβ127)

大馬勃生物標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFAIP1 Antibody防御β126(DEFβ126)

巨型艾美耳球蟲(chóng)Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFAIP8L2(TIPE-2) Antibody防御β125(DEFβ125)

玫瑰單胞菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF10B Antibody防御β124(DEFβ124)

鐮刀菌（大豆根腐病菌）Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF10B Antibody防御β123(DEFβ123)

蛹蟲(chóng)草Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF11A Antibody防御β121(DEFβ121)

乳桿菌屬PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF11A Antibody防御β119(DEFβ119)

pAAV-RC5PE-Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF11A Antibody防御β118(DEFβ118)

豬鏈球菌堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF11A Antibody防御β116(DEFβ116)

布魯氏菌膠體金標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF11A Antibody防御β115(DEFβ115)

產(chǎn)克雷伯氏菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF11B Antibody防御β114(DEFβ114)

纖細(xì)海勒蒙氏菌FITC標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF13B Antibody防御β113(DEFβ113)

軟帕氏孔菌羅丹明標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF13C Antibody防御β112(DEFβ112)

毛地黃殼針孢Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF13C Antibody防御β110(DEFβ110)

楊奇青霉Cy5標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF14 Antibody防御β103B(DEFβ103B)

松口蘑Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgMAnti-TNFRSF14 Antibody防御β103A(DEFβ103A)

蛋白激C亞型G抗體Hyphomonasrosenbergii人體結(jié)腸癌組織提取物

磷酯3蛋白抗體Ohtaekwangiakoreensis人體脂肪組織提取物

Rho鳥(niǎo)甘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體壞死梭桿菌壞死亞種人體表皮組織提取物

中心粒周蛋白抗體谷棒狀桿菌（黃色短桿菌）人體胎兒真皮組織提取物
Src/Abl抑制劑(Bosutinib)居巖牙殖球鉻鋇α-淀粉

環(huán)柄菇化亞金(I)胰蛋白

擬青霉溴化金腺病

彩色豆馬勃肉桂酰Ⅲ型膠原

釀酒酵母 (2-二環(huán)己基膦基-2′,6′-二甲氧基-1,1′-聯(lián)苯基)[2-(2-氨基乙基苯基)]鈀(II)腺病3型

釀酒酵母硝鑭六水合物腺病4型

多粘芽孢桿三乙腺病5型

側(cè)耳 2-乙基N,N,N′,N′-四異基亞磷酰二雄甾烯酮；雄烯酮

匍枝根霉(黑根霉) 2-溴-5-(三氟甲基)苯甲腺病1型

多毛孢 2-烯基-4,6-聯(lián)苯甲酰間苯二胰多肽

香榧嗜藍(lán)孢孔亞硫鈣支原體

杉葉散斑殼 5-尿支原體抗體

沃克曼枸櫞桿 3,4-二苯痘抗體

單增李斯特* 5-甲氧基-3-羧抗繆勒氏管

綠色木霉=木木霉 5-甲基-2-羧II型膠原蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)