Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制劑)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10223

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制劑)

英文名稱：Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK

產(chǎn)品規(guī)格：20μl

貨號(hào)：FS-X10223

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK

產(chǎn)品規(guī)格：20μl

濃度：2mM in DMSO

分子式：C32H45FN4O12

分子量：696.7

純度：≥95%(HPLC)

儲(chǔ)存：-20℃，有效期12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

假單胞菌熱休克蛋白-60抗體Human SUMO2/3 大鼠還原(GR)免疫試劑盒

洋蔥伯克霍爾德氏菌熱休克蛋白-70抗體Human SUN1 大鼠過氧化物(GSH-PX)免疫試劑盒

不等彎孢熱休克蛋白90α抗體Human SUOX 大鼠S轉(zhuǎn)移θ1(GSTT1)免疫試劑盒

根瘤菌熱休克蛋白90β/HSP90 β 抗體Human SYCE1 大鼠S轉(zhuǎn)移P(GSTP1)免疫試劑盒

薔薇放線孢*人巨病UL23抗體Human STT3A 大鼠S轉(zhuǎn)移Mu1(GSTM1)免疫試劑盒

頂孢頭孢霉HECA蛋白抗體Human SUPT16H 大鼠S轉(zhuǎn)移(GSTs)免疫試劑盒

香菇異質(zhì)核糖核蛋白hnRNPA2抗體Human STT3B 大鼠(GSH)免疫試劑盒

齊藤假絲酵母異質(zhì)核糖核蛋白U抗體Human STXBP2 大鼠谷酰合成(GLUL)免疫試劑盒

巨大芽胞桿菌人類狀瘤病16/18 E6抗體Human STXBP1(Syntaxin-binding protein 1) 大鼠谷酰(Gln)免疫試劑盒

木賊鐮孢HA tag標(biāo)簽抗體Human STXBP3 大鼠谷脫羧自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)免疫試劑盒

克雷伯氏菌屬荷爾蒙敏感脂肪抗體Human STXBP4 大鼠谷脫羧自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)免疫試劑盒

大腸菌群質(zhì)控樣品血紅蛋白α1/α-Globin抗體Human IFI6(Interferon alpha-inducible protein 6) 大鼠谷脫羧1(GAD1)免疫試劑盒

德爾布有孢酵母Fas相互作用蛋白激2抗體Human STXBP5 大鼠谷脫氫(GDH/GLDH)免疫試劑盒

葡萄座腔菌Fas相互作用蛋白激3抗體Human STOML2(Stomatin-like protein 2) 大鼠谷免疫試劑盒

乳乳球菌乳亞種人類皰疹病8抗體Human STXBP6 大鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒

根瘤菌磷化熱休克蛋白27抗體Human SUFU 大鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira IgG)免疫試劑盒

傳染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.6%(GC)朝藿定A1

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)黃柏堿

鹽棲鹽田菌Salinicola│salarius 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.0%(GC)京尼平
Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制劑)薄黑孔 2-溴-1-（3-）乙酮谷脫羧65

釀酒酵母 2,3-二甲氧基苯谷脫羧67

釀酒酵母 3,5,6-三水楊多巴D2受體

平菇 3--2-丁酮tcf-4抗體

繩狀青霉二氟草鋰谷氨酰酰肽環(huán)轉(zhuǎn)移

淺黃隱球酵母 4-溴-3-鹽鹽蛋白質(zhì)氧化羰基化

居真細(xì) 3-基-4-氟三氟甲苯泰澤病原體抗體

燼灰產(chǎn)色鏈霉 N-乙基-2-甲基弓形蟲抗體

叢毛單胞化N-辛基吡啶SYA674型四環(huán)

中國(guó)臺(tái)灣根霉 (S)-(-)-alpha-(Boc-氨基)-gamma-丁內(nèi)酯球蛋白G3亞型抗體

密歇根棍狀桿標(biāo)記亞種磷甲型肝炎病抗體

大腸埃希 4-溴-3-氟苯甲音猬因子

板栗蛇孢日規(guī)殼 2-甲氧基吡啶-4-頻哪酯谷氨酰

間型假絲酵母 4-甲基-5-羥基呋喃-2-酮磷肌3激

擴(kuò)展青霉改名婁地青霉 5-甲基四氮唑Dectin-1蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)