IRS-1/2抑制劑(NT157)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10895

產(chǎn)品介紹:

NT157是一種選擇性的IRS-1/2抑制劑IC50為0.3到0.8μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1384426-12-3

別名：Tyrphostin NT157

純度：99.19%

分子量：412.26

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：IRS-1/2抑制劑(NT157)

英文名稱：NT157

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

貨號：FS-X10895

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

炭黑曲霉大鼠中性粒趨化蛋白2Anti-TAF1 Antibody人白調(diào)節(jié)(LR)

松生莖點(diǎn)霉人類嗜T淋巴Ⅰ型病Anti-TACR3 Antibody人血小板生成(TPO)

長雙歧桿菌大鼠FMS樣酪激3Anti-TACR2 Antibody人血小板生成(TPO)

鴨疫里氏桿菌人麻疹病Anti-TAF1 Antibody人白血病抑制因子(LIF)

畢赤酵母大鼠FMS樣酪激3配體Anti-TAF13 Antibody人白血病抑制因子(LIF)

耐冷冷桿菌大鼠堿性成纖維生長因子9Anti-TAF1A Antibody人Salusin-α

香菇人流行性腮腺炎Anti-TAF15 Antibody人Salusin-α

膜醭假絲酵母大鼠堿性成纖維生長因子4Anti-TAF3 Antibody人胰島受體底物2(IRS-2)

咸海鮮芽孢桿菌人抗流行性出血熱病抗體IgGAnti-TAF4 Antibody人胰島受體底物2(IRS-2)

傳染性支氣管炎病人痢疾內(nèi)阿巴抗原Anti-TAF5 Antibody人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)

弗雷德里克斯堡假單胞菌大鼠堿性成纖維生長因子6Anti-TAF5L Antibody人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)

紫紅曲霉大鼠性成纖維生長因子1Anti-TAF6L Antibody人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)

環(huán)形泰勒蟲（安西株）人萊姆IgGAnti-TAGAP Antibody人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)

中間根瘤菌屬人空腸彎曲菌黏附蛋白Anti-TAIP-2 Antibody人胰島淀粉樣多肽(IAPP)

根瘤菌人衣原體蛋白樣活性因子Anti-TANK Antibody人胰島淀粉樣多肽(IAPP)

玫煙色棒束孢大鼠凋亡相關(guān)因子Anti-TAL1 Antibody人糖化蛋白(GSP)

尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體血紅鉚釘菇HASMC*培養(yǎng)基

未分化胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1抗體一色齒毛菌DMEM 培養(yǎng)基（高糖）

囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Use1抗體葡萄座腔菌（斜面）大鼠軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基

軟骨基質(zhì)相關(guān)蛋白UCMA抗體白色小環(huán)柄菇TM3細(xì)胞專用培養(yǎng)基
IRS-1/2抑制劑(NT157)豬鏈球六價鉻/Cr（Ⅵ）過氧化物

白僵 2--3,5-二硝基三氟甲苯葡萄糖

栗疫病鉻/Cr5脂加氧

細(xì)交鏈孢霉鈷/Co5脂加氧

發(fā)酵成對桿脫氧熊果半胱蛋白9

解脂假絲酵母 L-抗壞血-2-磷酯鎂色C

麥根腐平臍蠕孢鎘/Cd分泌型球蛋白G

類馬鏈球大茴香油顆粒B

副豬嗜血桿柚皮二氫查爾酮穿孔;成孔蛋白

枯草芽孢桿甘草輸血傳播病

黏液桿胰島生長因子1

蒼黃鏈霉愈創(chuàng)奧肌

禽腺病Ⅰ型鈣/Ca酮戊二脫氫復(fù)合體

野尻鏈霉鉍/Bi檸檬合

球色單隔孢屬羥基瓜爾膠異檸檬脫氫

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