γ-secretase抑制劑(BMS-708163)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10986

產(chǎn)品介紹:

BMS-708163是有效的γ-secretase抑制劑，抑制Aβ42和Aβ40的產(chǎn)生，IC50值分別為0.27nM和0.30nM；同時抑制Notch胞內(nèi)結構域(NICD)和CYP2C19，IC50值分別為0.84nM和20μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1146699-66-2

別名：Avagacestat

純度：99.93%

分子量：520.89

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：γ-secretase抑制劑(BMS-708163)

英文名稱：BMS-708163

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10986

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

秦氏蜜環(huán)菌Escherichia coli大鼠磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)

白靈側耳Escherichia coli大鼠核因子κB(NF-κB)

大腸埃希菌Escherichia coli大鼠核因子κB(NF-κB)

聚生殼菌Escherichia coli大鼠樹突狀表面特異性C型凝集-間黏附分子3結合非整合分子(DC-SIGN/CD209)

曲霉Escherichia coli大鼠樹突狀表面特異性C型凝集-間黏附分子3結合非整合分子(DC-SIGN/CD209)

耐輻射薄層菌Escherichia coli大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)

鏈霉菌屬Escherichia coli大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)

瑞士乳桿菌Escherichia coli大鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)

暗棕色桿菌屬Escherichia coli大鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)

長柄大環(huán)柄菇Escherichia coli大鼠c-fos

鞘單胞菌Escherichia coli大鼠c-fos

細疣籃狀菌Escherichia coli大鼠c-jun

尖孢鐮孢Escherichia coli大鼠c-jun

pCDNA3.1(+）Escherichia coli大鼠可溶性白介6受體(sIL-6R)

阿達青霉Escherichia coli大鼠可溶性白介6受體(sIL-6R)

釀酒酵母Escherichia coli大鼠吡啶(PYD)

蛋白激Ctheta抗體大青褶傘小鼠樹突狀細胞

半胱天冬-3原抗體圓孢蘑菇小鼠腎小球系膜細胞

蛋白磷2C亞型α抗體黑紅皮孔菌正常人食管鱗狀上皮細胞

蛋白酪磷1C抗體雅致栓孔菌人正常食管上皮細胞
γ-secretase抑制劑(BMS-708163)大腸埃希反式-橙花叔

紅色紅曲亞太因

一品紅尾孢（一品紅褐斑?。?/span> 尾葉香茶菜戊

釀酒酵母異牡荊黃

釀酒酵母苯甲酰新烏頭原堿鹽鹽

貝氏葡萄座腔脫氫樅

丁香直絲鏈霉毛萼晶A

遲緩芽孢桿 β-常春藤

香氣紅冬孢鎖擲孢酵母偽石蒜堿

矩圓黑盤孢去氫丹參新酮

白腐盾殼霉脫水羊藿

白僵鹽普羅托平; 鹽藍堇堿

大豆慢生根瘤醉魚草皂甙IV

釀酒酵母前胡

黃桿銀杏C17:1

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