AKT激酶抑制劑(AZD5363)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10401

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：AKT激酶抑制劑(AZD5363)

英文名稱：AZD5363

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10401

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：AZD5363

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

AZD5363是一種有效的泛AKT激酶抑制劑，抑制Akt1，Akt2和Akt3，IC50分別為3，7和7nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1143532-39-1

純度：97.89%

分子量：428.92

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

木賊鐮孢菌P-鈣粘附分子抗體Anti-AHR Antibody單核增多性李斯特菌O((LLO)

淺灰白鏈霉菌腺環(huán)化激活肽-38抗體Anti-AHSA1 Antibody單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)

假單胞菌屬腫瘤抑制基因P53蛋白抗體（野生型P53）Anti-AHR Antibody單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)

釀酒酵母腫瘤抑制基因p63α抗體Anti-AIF1 Antibody單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)

玉大斑病菌磷二酯4A8抗體Anti-AHSG Antibody單核趨化蛋白2(MCP-2)

薄花邊傘血小板源性生長因子AB+BB抗體Anti-AHSG Antibody單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)

東方伊薩酵母增殖核抗原抗體Anti-AHSG Antibody單核趨化蛋白1(MCP-1)

棲熱菌腦特異性多肽蛋白19抗體Anti-AICDA Antibody單氧化(MAO)

金龜子綠僵菌三磷腺門控陽離子通道蛋白抗體Anti-AIFM1 Antibody帶3蛋白(Band3)

枯草芽孢桿菌硫氧還蛋白過氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體Anti-AIFM1 Antibody大皰性類天皰瘡抗體(BP)

鴨肝炎病p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體Anti-AIFM1 Antibody(PB0388)大內(nèi)皮(Big ET-1)

交鏈孢磷核糖咪唑羧化抗體Anti-AIMP2 Antibody大內(nèi)皮(Big ET)

*無色桿菌神經(jīng)生長因子受體抗體Anti-AIM2 Antibody(PB0721)大腸菌(colicin)

果生鏈核盤菌腫瘤錯配修復(fù)基因PMS1抗體Anti-AIP Antibody大腸癌專一抗原4(CCSA-4)

貝氏葡萄座腔菌腺單磷活化蛋白激γ2抗體Anti-AIRE Antibody大腸癌專一抗原3(CCSA-3)

焦曲霉血小板衍化生長因子β抗體Anti-AKAP2 Antibody大腸癌專一抗原2(CCSA-2)

細(xì)極鏈格孢Alternaria│tenuissima (Kunze) Wiltshire 質(zhì)量規(guī)格：>99%

病毒Influenzavirus A│Avian influenza virus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%
AKT激酶抑制劑(AZD5363)暗孢節(jié)菱孢反式-β-乙烯抗N-甲基-D-天冬受體

伯氏致病桿 2,4-二氟苯肼鹽鹽絨毛膜促性腺

大腸埃希檸檬N-甲基-D-天冬受體亞單位NR1

植物乳桿 4-氟-3-羥基N-甲基-D-天冬受體亞單位NR2

枯草芽孢桿 2-氟-5-羥基B瘤-XL

呈紫色核鏈霉腎上腺金屬硫蛋白

南類芽孢桿 7-溴五羥乙

副凝聚短狀桿 N-甲基-2-(2-氨乙基)-吡咯烷鹽多巴

稀褶黑菇碳鎘鹽五羥色

PL16（平菇） N-叔丁氧羰基-L-蛋氨乳

嗜中溫溫暖桿三(二亞芐- base酮)二鈀(0)貓杯狀病抗體

膠孢 2--2′,4′-二氟苯乙酮白介21

玉轉(zhuǎn)基因玉 MON89034 品系 4-(二基亞甲基)-2-甲基-6-(4-二甲基氨基苯乙烯基)-4H-吡喃色P4502D6

釀酒酵母磷三酯色P4502C9

玫煙色棒束孢 1,1,2,2-四氟乙基乙鐵蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)