抗代謝劑Floxuridine(PEPT1抑制劑)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10786

產(chǎn)品介紹:

Floxuridine(5-fluorodeoxyuridine)為抗代謝劑，可抑制PEPT1，GI50為5.1μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：50-91-9

別名：5-Fluorouracil 2-deoxyriboside

純度：99.93%

分子量：246.19

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：抗代謝劑Floxuridine(PEPT1抑制劑)

英文名稱：Floxuridine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg

貨號：FS-X10786

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

釀酒酵母巨病 IgM(捕獲法一步法)Anti-MAGEC2 Antibody人腎上腺髓質(zhì)(ADM)

薄層桿菌巨病 IgM(捕獲法二步法)Anti-MAGED1 Antibody人腎上腺髓質(zhì)(ADM)

大腸埃希氏菌風(fēng)疹胞病 IgG(間接法二步法)Anti-MAGI2 Antibody人免疫反應(yīng)性生長激(irGH)

小單孢菌風(fēng)疹胞病 IgM(間接法二步法)Anti-MAN1B1 Antibody人免疫反應(yīng)性生長激(irGH)

枯草芽孢桿菌風(fēng)疹病 IgM(捕獲法一步法)Anti-MAP1LC3A Antibody人抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)

洪吉氏菌G Fc段受體ⅠAnti-MANF Antibody人抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)

硬毛栓孔菌鮭魚補體蛋白3Anti-MAP1A/MAP1B LC3 A/B Antibody人甘肽/甘(GAL)

毛頭鬼傘兔子α2抗纖溶Anti-MAP2 Antibody人甘肽/甘(GAL)

黑球漆斑菌小鼠乳脫氫Anti-MAP2K3 Antibody人促胰液/分泌受體(SR)

釀酒酵母大鼠高鐵血紅蛋白Anti-MAP2K4 Antibody人促胰液/分泌受體(SR)

氧化節(jié)桿菌風(fēng)疹胞病 IgM(捕獲法二步法)Anti-MAP2K6 Antibody人雌激受體(ER)

草菇弓形蟲抗體 IgG(間接法二步法)Anti-MAP3K10 Antibody人雌激受體(ER)

弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法)Anti-MAP3K13 Antibody人超敏生長激(U S-GH)

球孢白僵菌弓形蟲抗體 IgM(捕獲法一步法)Anti-MAP3K10 Antibody人超敏生長激(U S-GH)

枯草芽孢桿菌弓形蟲抗體 IgM(捕獲法二步法)Anti-MAP3K20 Antibody人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)

平菇(側(cè)5)單純皰疹Ⅰ型病 IgG(間接法二步法)Anti-MAP3K20 Antibody人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)

環(huán)指蛋白121抗體棲土曲霉成人真皮成纖維細(xì)胞

環(huán)指蛋白43抗體醬油曲霉鼠B淋巴瘤細(xì)胞

腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記蛋白2抗體寄生曲霉tTA基因修飾的小鼠睪丸畸胎瘤細(xì)胞（B類）

環(huán)指蛋白169抗體嗜熱鏈霉菌人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞
抗代謝劑Floxuridine(PEPT1抑制劑)癭青霉苯頻哪酯腫瘤壞死因子α

嗜肉考克氏山梨麥康凱瓊脂（SMAC）平板（9cm）轉(zhuǎn)化生長因子α

小孢根霉華變種麥康凱瓊脂平板（9cm）轉(zhuǎn)化生長因子β

球孢白僵 3,4,5-氧基苯轉(zhuǎn)化生長因子β1

膠孢中國藍(lán)瓊脂平板（9cm）轉(zhuǎn)化生長因子β2

團炭角亞硫鉍瓊脂平板（9cm）轉(zhuǎn)錄因子

紫色直絲鏈霉 XLD培養(yǎng)基平板（9cm）總膽固

鏈格孢 4-氟-3-甲氧基苯甲總膽汁

果生鏈核盤 HE瓊脂平板（9cm）組

擬盤多毛孢 SS瓊脂平板（9cm）組織型纖溶原激活劑

兔出血癥病伊紅美藍(lán)瓊脂平板（9cm）補體片段3a

假單孢巧克力瓊脂平板（9cm）瘟熱病抗體

蘇云金芽孢桿辛可尼定CXC趨化因子配體9

Malassezia cuniculi 營養(yǎng)瓊脂平板（9cm）腦紅蛋白

褐囊蜜環(huán) 李氏增肉湯（LB1）白介12

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