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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PI3K/mTOR/DNA-PK抑制劑(LY3023414)
貨號(hào) | FS-X10474 |
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中文名稱:PI3K/mTOR/DNA-PK抑制劑(LY3023414)
英文名稱:LY3023414
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10474
產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品價(jià)格:詢價(jià)LY3023414有效且選擇性地抑制PI3Kα,PI3Kβ,PI3Kδ,PI3Kγ,mTOR和DNA-PK,IC50分別為6.07nM,77.6nM,38nM,23.8nM,165nM和4.24nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1386874-06-1 純度:99.70% 分子量:406.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
林生蠟?zāi)⒘谆?/span>Rad51抗體Anti-EDA Antibody2(PRM2)
具核梭桿菌聚核亞種磷化成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體Anti-EDA Antibody釉原蛋白Y-連鎖(AMELY)
毛木耳(臺(tái)耳)磷化G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體Anti-EDNRB Antibody釉原蛋白X-連鎖(AMELX)
藤倉(cāng)鐮孢G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體Anti-EDNRB Antibody(PB0585)釉成熟蛋白(AMTN)
枯草芽孢桿菌環(huán)指蛋白1抗體Anti-EED Antibody誘導(dǎo)型一氧化氮合(NOS2)
糞腸球菌原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體Anti-EEA1 Antibody有機(jī)溶質(zhì)載體伴侶1(OSCP1)
尿八疊球菌磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體Anti-EGF Antibody游離脂肪受體1(FFAR1)
類諾卡氏菌屬腫瘤血管內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白Robo4抗體Anti-EGF Antibody硬脂酰去飽和(SCD)
馬里斯棒狀桿菌軸突導(dǎo)向受體抗體Anti-EGF Antibody硬纖毛蛋白(STRC)
馬賽菌絡(luò)絲蛋白抗體Anti-EGF Antibody應(yīng)激誘導(dǎo)磷蛋白1(STIP1)
頭花革菌RUSC1抗體Anti-EGFR Antibody營(yíng)養(yǎng)蛋白(TRO)
枯草芽胞桿菌RUSC2抗體Anti-EGFL6 Antibody隱花色2(CRY2)
釀酒酵母RAGEF2蛋白抗體Anti-EGFR Antibody隱花色1(CRY1)
釀酒酵母G蛋白偶聯(lián)受體RAB23抗體Anti-EGFR Antibody乙-N-甲基轉(zhuǎn)移(INMT)
山茶G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)因子14抗體Anti-EGFR Antibody陰離子/糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(AST)
油菜假單胞菌核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體/核因子kB受體活化因子抗體Anti-EGFR Antibody易位關(guān)聯(lián)膜蛋白1(TRAM1)
致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
擬內(nèi)孢霉Endomycopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,可用于培養(yǎng)
莖點(diǎn)霉Phoma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
PI3K/mTOR/DNA-PK抑制劑(LY3023414)小白菇 N-芐基托品酮色羥化
啤酒酵母 7-甲基-1,5-苯并二氧雜環(huán)庚烷-3-酮環(huán)氧二十碳三烯
雜色曲霉 2--5-苯甲二羥二十碳三烯
灰葡萄孢(灰霉?。?/span> 2--6-甲基-3-吡啶甲卵泡受體
嗜熱鏈球 L-天冬雙芐酯對(duì)甲苯磺鹽鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白IgG抗體
Deinococcus 噁唑鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白IgM抗體
產(chǎn)黃青霉 5-甲氧基-2-甲基-3-乙蛋白激R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激
魯氏接合酵母 4-溴-2-羥基苯金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1
蘋(píng)果鏈格孢 S-乙酰半胱鹽蛋腦啡肽
大腸埃希 十氫化萘-d18內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1
草青霉 N,N,N,N,-四環(huán)氧基-4,4-二氨基二苯微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
反硝化鹽單胞 1-萘乙甲酯組H1受體
山茶 磷二氫-15N速激肽1
杭州弧 二-μ-雙[5--2-[(4-)(肟基)甲基]苯基]鈀(II)二聚體成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體
赫黃核鏈霉 戊二酰天冬酰內(nèi)肽
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