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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> MDMX小分子抑制劑(SJ-172550)
貨號(hào) | FS-X10978 |
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英文名稱:SJ-172550
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10978
產(chǎn)品介紹:
SJ-172550是MDMX的小分子抑制劑;與野生型p53肽競爭性結(jié)合于MDMX的EC50值為5μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):431979-47-4 純度:99.44% 分子量:428.87 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
綠粘帚霉動(dòng)物RNAout(快速動(dòng)物總RNA提取試劑)Escherichia coli小鼠促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)
芽孢桿菌植物RNAout(植物RNA提取試劑)Escherichia coli小鼠胰島受體β(ISR-β)
白假絲酵母血液RNAout(血液總RNA提取試劑)Escherichia coli小鼠胰島受體β(ISR-β)
赤紅球菌病RNAout(病RNA提取試劑)Escherichia coli小鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)
小單孢菌細(xì)菌RNA提取試劑Escherichia coli小鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)
鏈格孢菌RNAin(非凍型RNA樣品保存液)Escherichia coli小鼠淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)
黃曲霉總RNA提取試劑Escherichia coli小鼠淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)
褪色()液體樣品RNA提取試劑Escherichia coli小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)
Bacillus anthracis RNA高效保存液Escherichia coli小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)
枯草芽胞桿菌(黑色變種)植物RNA提取的試劑Escherichia coli小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)
金龜子綠僵菌RNAon(即用型RNA變性上樣液)Escherichia coli小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)
白黃鏈霉菌RNAsharp(RNA電泳帶銳化劑)Escherichia coli小鼠透明質(zhì)(HA)
生暗灰鏈霉菌蛋白抽提試劑盒-I (實(shí)體組織和蛋白抽提)Escherichia coli小鼠透明質(zhì)(HA)
大豆慢生根瘤菌蛋白抽提試劑盒-II (液體樣品蛋白抽提和回收)Escherichia coli小鼠胰高血糖樣肽1(GLP-1)
Lonsdalea quercina subsp. quercina核-胞漿蛋白制備試劑盒 (Nuclear-Cytosol Extraction Kit)Escherichia coli小鼠胰高血糖樣肽1(GLP-1)
芥黃蜜環(huán)菌伊紅 Y(Eosin Y Sodium)Escherichia coli小鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)
癌/睪丸抗原58抗體煙草鐮刀菌鼬肺上皮細(xì)胞
NADPH氧化4抗體印度肯德座霉SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞(干細(xì)胞庫保藏)
腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗體禾谷昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,經(jīng)mitomycin-C處理,P3,300萬細(xì)胞(干細(xì)胞庫保藏)
核干細(xì)胞因子抗體鳥核結(jié)合蛋白3木賊鐮刀菌昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,經(jīng)射線處理,P3,0萬細(xì)胞(干細(xì)胞庫保藏)
MDMX小分子抑制劑(SJ-172550)環(huán)帶狀枝頂孢 Griffithazanone A巰基轉(zhuǎn)移
釀酒酵母 Stilbostemin N外信號(hào)調(diào)節(jié)激
細(xì)鏈格孢 靈芝烯H分泌型球蛋白T
金黃色葡萄球 Sulfuretin硫轉(zhuǎn)移
膠韌革(榆耳,榆蘑) Mupinensisone脂質(zhì)過氧化物
異常畢赤酵母 靈芝烯F脯羥化
聚多曲霉 Hennadiol果糖-2,6-二磷3
解脂假絲酵母 靈芝TN糖代謝調(diào)節(jié)蛋白
茄勞爾氏 Rhamnocitrin肉堿脂酰轉(zhuǎn)移1
鼠乳桿 Lochnericine脂肪分解
大腸埃希 靈芝LM2低密度脂蛋白
串珠鐮孢 Limonol氧化三
蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 靈芝AM1脂肪延長5
淺玫瑰鏈霉 Cycloart-22-ene-3,25-diol幽門螺旋桿抗體
鏈霉 Sibiricin果糖
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